一种粪便中提取幽门螺杆菌DNA的方法技术

本发明专利技术适用于生物技术领域，提供一种粪便中提取幽门螺杆菌DNA的方法，包括如下步骤：采集感染有幽门螺杆菌患者的新鲜粪便样本置于离心管中；向离心管中加入细胞裂解液，进行均质化，所述细胞裂解液包括：Tris‑HCl、乙二胺四乙酸、异硫氰酸胍、曲拉通X‑100、异丙醇、十二烷基硫酸钠、氯化钠、蛋白酶K、改性聚乙二醇、改性甜菜碱，通过在细胞裂解液中加入改性聚乙二醇，增强对游离DNA的捕捉，促使DNA进一步浓缩富集，提高后续DNA与磁珠的结合效率，通过加入改性甜菜碱，提高去除蛋白、酯类等杂质等作用，减少后续磁珠吸附的杂质，改性聚乙二醇和改性甜菜碱具有协同增效作用，能够提高提取DNA纯度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，尤其涉及一种粪便中提取幽门螺杆菌dna的方法。

技术介绍

1、幽门螺杆菌是一种螺旋形、微厌氧、的细菌，可寄生在人的胃部，并可随粪便少量的排出体外。全世界有超过半数的人感染hp，目前对幽门螺杆菌的诊断主要采用c13吹气实验，但其存在着约10％的误诊率，因此不能作为检测幽门螺杆菌的金标准，并且c13具有一定的放射性，可能对人体有一定的伤害。

2、粪便中检幽门螺杆菌可作为一个检测方向，粪便样本采集无创，检测通量高，能够适应大规模人群的筛查，然而由于粪便中存在大量的杂质，影响核酸的提取效率，目前市场上的粪便核酸提取试剂盒，提取的幽门螺杆菌dna浓度、纯度较低，存在较多杂质成分会进一步抑制pcr的扩增。

技术实现思路

1、本专利技术提供一种粪便中提取幽门螺杆菌dna的方法，旨在解决上述的问题。

2、本专利技术是这样实现的，一种粪便中提取幽门螺杆菌dna的方法，包括如下步骤：

3、1）采集感染有幽门螺杆菌患者的新鲜粪便样本置于离心管中；

<p>4、2）向离心管本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种粪便中提取幽门螺杆菌DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的粪便中提取幽门螺杆菌DNA的方法，其特征在于，所述细胞裂解液包括：50-150mM的Tris-HCl、20-40mM的乙二胺四乙酸、4-6mol/L的异硫氰酸胍、3-7％体积分数的曲拉通X-100、33-37％体积分数的异丙醇、17-23g/L的十二烷基硫酸钠、2-4g/L的氯化钠、0.8-1.2g/L的蛋白酶K、45-55g/L的改性聚乙二醇、35-45g/L的改性甜菜碱。

3.如权利要求2所述的粪便中提取幽门螺杆菌DNA的方法，其特征在于，所述细胞裂解液包括：100mM...

【技术特征摘要】

1.一种粪便中提取幽门螺杆菌dna的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的粪便中提取幽门螺杆菌dna的方法，其特征在于，所述细胞裂解液包括：50-150mm的tris-hcl、20-40mm的乙二胺四乙酸、4-6mol/l的异硫氰酸胍、3-7％体积分数的曲拉通x-100、33-37％体积分数的异丙醇、17-23g/l的十二烷基硫酸钠、2-4g/l的氯化钠、0.8-1.2g/l的蛋白酶k、45-55g/l的改性聚乙二醇、35-45g/l的改性甜菜碱。

3.如权利要求2所述的粪便中提取幽门螺杆菌dna的方法，其特征在于，所述细胞裂解液包括：100mm的tris-hcl、30mm的乙二胺四乙酸、5mol/l的异硫氰酸胍、5％体积分数的曲拉通x-100、35％体积分数的异丙醇、20g/l的十二烷基硫酸钠、3g/l的氯化钠、1g/l的蛋白酶k、50g/l的改性聚乙二醇、40g/l的改性甜菜碱。

4.如权利要求1所述的粪便中提取幽门螺杆菌dna的方法，其特征在于，所述改性聚乙二醇的制备方法如下：按重量份计，将10-20份聚乙二醇溶于100-120份去离子水中，然后加入1-3份聚天冬氨酸，搅拌30-50min，最后加入2-4份3-氨基-1，2-丙二醇，升温至80-90℃搅拌1-3h，用二氯甲烷萃取，用无水乙醚沉淀，真空干燥得到改性聚乙二醇。

5.如权利要求1所述的粪便中提取幽门螺杆菌dna的方法，其特征在于，所述改性甜菜碱的制备方法如下：按重量份计...

【专利技术属性】
技术研发人员：王军一，肖雯，闫楠，屠依龙，朱紫纯，
申请(专利权)人：杭州和壹基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：