包含mRNA和脂质重构植物信使包的组合物制造技术

本文公开了mRNA治疗性组合物，其包含一种或多种多核苷酸，所述一种或多种多核苷酸编码一种或多种肿瘤抗原性、免疫原性或信号传导多肽，所述一种或多种多核苷酸调配在包括天然脂质和可电离脂质的脂质重构植物信使包(LPMP)内。本公开还包含一种用于制备mRNA治疗性组合物的方法，所述方法包括：在存在可电离脂质的情况下使包括经纯化的PMP脂质的膜复原以产生包括所述可电离脂质的LPMP，以及用一种或多种多核苷酸装载到所述LPMP中，所述一种或多种多核苷酸编码一种或多种肿瘤抗原性或免疫原性多肽。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

技术介绍

1、商业或开发中的疫苗(例如，癌症疫苗)通常基于整个微生物、蛋白质抗原、肽、多糖或脱氧核糖核酸(dna)疫苗以及其组合。rna多核苷酸作为治疗剂的用途是新兴领域。

2、因此，存在着开发经增强的rna递送系统以实现rna治疗剂(如癌症疫苗)的更有效、易于扩展且稳定递送的需求。

技术实现思路

1、一方面，本文提供了一种mrna治疗性组合物，其包括编码一种或多种抗原性(例如，肿瘤抗原性)或信号传导多肽的一种或多种多核苷酸。所述一种或多种多核苷酸调配在包括天然脂质和可电离脂质的脂质重构植物信使包(lpmp)内。所述可电离脂质具有以下所列特性中的两种或更多种：

2、(i)至少2个可电离胺；

3、(ii)至少3个脂质尾部，其中所述脂质尾部中的每个脂质尾部的长度为至少6个碳原子；

4、(iii)约4.5至约7.5的pka；

5、(iv)由具有至少两个原子的链分隔开的可电离胺和杂有机基团；以及

6、(v)至少10的n:p比率。

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【技术保护点】

1.一种mRNA治疗性组合物，其包括：

2.根据权利要求1所述的mRNA治疗性组合物，其中所述天然脂质是从柠檬或藻类中提取的。

3.根据权利要求1所述的mRNA治疗性组合物，其中所述LPMP进一步包括固醇和聚乙二醇(PEG)-脂质缀合物。

4.根据权利要求3所述的mRNA治疗性组合物，其中所述LPMP所包括的可电离脂质:天然脂质:固醇:PEG-脂质的摩尔比为约35:50:12.5:2.5。

5.根据权利要求3所述的mRNA治疗性组合物，其中所述LPMP所包括的可电离脂质:天然脂质:固醇:PEG-脂质的摩尔比为约35:20:42.5:2.5。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种mrna治疗性组合物，其包括：

2.根据权利要求1所述的mrna治疗性组合物，其中所述天然脂质是从柠檬或藻类中提取的。

3.根据权利要求1所述的mrna治疗性组合物，其中所述lpmp进一步包括固醇和聚乙二醇(peg)-脂质缀合物。

4.根据权利要求3所述的mrna治疗性组合物，其中所述lpmp所包括的可电离脂质:天然脂质:固醇:peg-脂质的摩尔比为约35:50:12.5:2.5。

5.根据权利要求3所述的mrna治疗性组合物，其中所述lpmp所包括的可电离脂质:天然脂质:固醇:peg-脂质的摩尔比为约35:20:42.5:2.5。

6.根据权利要求1所述的mrna治疗性组合物，其中所述可电离脂质选自由以下组成的组：1,1'-((2-(4-(2-((2-(双(2-羟基十二烷基)氨基)乙基)(2-羟基十二烷基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)乙基)氮烷二基)双(十二烷-2-醇)(c12-200)、md1(ckk-e12)、of2、epc、za3-ep10、tt3、lp01、5a2-sc8、脂质5、sm-102(脂质h)和alc-315。

7.根据权利要求1所述的mrna治疗性组合物，其中所述可电离脂质为其中r为c8-c14烷基。

8.根据权利要求1所述的mrna治疗性组合物，其中所述多肽包括肿瘤特异性抗原、肿瘤相关抗原、肿瘤新抗原或其组合。

9.根据权利要求1所述的mrna治疗性组合物，其中所述多肽包括p53、art-4、bage、ss-连环蛋白/m、bcr-abl camel、cap-1、casp-8、cdc27/m、cdk4/m、cea、claudin-12、c-myc、ct、cyp-b、dam、elf2m、etv6-aml1、g250、gage、gnt-v、gap 100、hage、her-2/neu、hpv-e7、hpv-e6、hast-2、htert(或htrt)、lage、ldlr/fut、mage-a，优选地mage-a1、mage-a2、mage-a3、mage-a4、mage-a5、mage-a6、mage-a7、mage-a8、mage-a9、mage-a10、mage-a11或mage-a12，mage-b、mage-c、mart-1/melan-a、mc1r、肌球蛋白/m、muc1、mum-1、-2、-3、na88-a、nf1、ny-eso-1、ny-br-1、p190较小bcr-abl、plac-1、pml/rara、prame、蛋白酶3、psa、psm、rage、ru1或ru2、sage、sart-1或s art-3、scgb3a2、scp1、scp2、scp3、ssx、survivin、tel/aml1、tpi/m、trp-1、trp-2、trp-2/int2、tpte、wt、wt-1或其组合。

10.根据权利要求1所述的mrna治疗性组合物，其中所述多肽包括cd2、cd3、cd4、cd8、cd11b、cd14、cd16、cd19、cd20、cd22、cd25、cd27、cd33、cd37、cd38、cd40、cd44、cd45、cd47、cd52、cd56、cd70、cd79、cd137、4-1bb、5t4、ags-5、ags-16、血管生成素2、b7.1、b7.2、b7dc、b7h1、b7h2、b7h3、bt-062、btla、caix、癌胚抗原、ctla4、cripto、ed-b、erbb1、erbb2、erbb3、erbb4、egfl7、epcam、epha2、epha3、ephb2、fap、纤连蛋白、叶酸受体、神经节苷脂gm3、gd2、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(gitr)、gploo、gpa33、gpnmb、hla、hla-dr、icos、igf1r、整合素av、整合素ανβ、lag-3、lewis y、间皮素、c-met、mn碳酸酐酶ix、muc1、muc16、粘连蛋白-4、kgd2、notch、ox40、ox40l、pd-1、pdl1、psca、psma、rankl、ror1、ror2、slc44a4、多配体蛋白聚糖-1、taci、tag-72、肌腱蛋白、tim3、trailr1、trailr2、vegfr-1、vegfr-2、vegfr-3以及其变体。

11.根据权利要求1所述的mrna治疗性组合物，其中所述多肽为il-2肽、il-2-ra、tdtomato、cre重组酶、gfp、egfp、抗cd19、cd20、car-t、抗her2、依那西普(恩利)、修美乐、促红细胞生成素、依泊汀、非格司亭、可瑞达、利妥昔单抗、罗米司亭、沙格司亭或其片段或亚基。

12.根据权利要求1所述的mrna治疗性组合物，其中所述多核苷酸为编码il-2分子的mrna，所述il-2分子包括与表i-iii中的任一者中所提供的il-2分子的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

13.根据权利要求1所述的mrna治疗性组合物，其中所述肿瘤抗原性多肽包括选自由以下组成的组的肿瘤抗原：癌、肉瘤、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病以及其组合。

14.根据权利要求13所述的mrna治疗性组合物，其中所述肿瘤抗原性多肽包括肺癌抗原。

15.根据权利要求1所述的mrna治疗性组合物，其中所述多核苷酸为mrna，并且所述mrna源自

16.根据权利要求15所述的mrna治疗性组合物，其中所述dna分子进一步包括启动子。

17.根据权利要求16所述的mrna治疗性组合物，其中所述启动子位于5'utr处。

18.根据权利要求15所述的mrna治疗性组合物，其中所述启动子为t7启动子、t3启动子或sp6启动子。

19.根据权利要求15所述的mrna治疗性组合物，其中所述rna分子为自复制rna分子。

20.根据权利要求15或权利要求19所述的mrna治疗性组合物，其中所述rna分子进一步包括5'帽。

21.根据权利要求20所述的mrna治疗性组合物，其中所述5'帽具有cap 1结构、cap 1(m6a)结构、cap 2结构、cap 3结构、cap 0结构或其任何组合。

22.根据权利要求12所述的mrna治疗性组合物，其中所述il-2分子包括天然存在的il-2分子、天然存在的il-2分子的片段或其变体。

23.根据权利要求22所述的mrna治疗性组合物，其中所述il-2分子包括天然存在的il-2分子的变体或其片段。

24.根据权利要求15所述的mrna治疗性组合物，其中所述mrna包括5'非翻译区(utr)和/或3'utr。

25.根据权利要求24所述的mrna治疗性组合物，其中所述5'utr包括kozak序列。

26.根据权利要求24所述的mrna治疗性组合物，其中所述3'utr包括源自氨基末端分裂增强子(aes)的序列。

27.根据权利要求24所述的mrna治疗性组合物，其中所述3'utr包括源自经线粒体编码的12s rrna(mtrnrl)的序列。

28.根据权利要求15所述的mrna治疗性组合物，其中所述mrna包括poly(a)序列。

29.根据权利要求28所述的mrna治疗性组合物，其中所述poly(a)序列为由30个腺苷残基的序列、10个核苷酸接头序列和70个腺苷残基的序列组成的110个核苷酸序列。

30.根据权利要求1所述的mrna治疗性组合物，其中所述lpmp为选自由以下组成的组的亲脂性部分：脂质复合物、脂质体、脂质纳米颗粒、基于聚合物的载剂、外来体、板层小体、胶束和乳液。

31.根据权利要求1所述的mrna治疗性组合物，其中所述lpmp为选自由以下组成的组的脂质体：阳离子脂质体、纳米脂质体、蛋白脂质体、单层脂质体、多层脂质体、含神经酰胺的纳米脂质体和多囊脂质体。

32.根据权利要求1所述的mrna治疗性组合物，其中所述lpmp为脂质纳米颗粒。

33.根据权利要求1所述的mrna治疗性组合物，其中所述lpmp的大小小于约200nm。

34.根据权利要求33所述的mrna治疗性组合物，其中所述lpmp的大小小于约150nm。

35.根据权利要求33所述的mrna治疗性组合物，其中所述lpmp的大小小于约100nm。

36.根据权利要求32所述的mrna治疗性组合物，其中所述脂质纳米颗粒的大小为约55nm至约80nm。

37.根据权利要求3所述的mrna治疗性组合物，其中所述peg-脂质缀合物为peg-dmg或peg-pe。

38.根据权利要求37所述的mrna治疗性组合物，其中所述peg-dmg为peg2000-dmg或peg2000-pe。

39.根据前述权利要求中任一项所述的mrna治疗性组合物，其中所述lpmp包括：

40.根据权利要求39所述的mrna治疗性组合物，其中所述lpmp包括：

41.根据前述权利要求中任一项所述的mrna治疗性组合物，其中所述mrna治疗性组合物的总脂质:多核苷酸的重量比为约50:1至约10:1。

42.根据权利要求41所述的mrna治疗性组合物，其中所述mrna治疗性组合物的总脂质:多核苷酸的重量比为约44:1至约24:1。

43.根据权利要求41所述的mrna治疗性组合物，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·莫萨赫博，S·帕特尔，S·克拉克，E·阿拉法，R·博戈拉德，
申请(专利权)人：赛欧生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：