一种抗夜来香花叶病毒的弱毒疫苗R181K及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，提供了一种抗夜来香花叶病毒的弱毒疫苗R181K及其应用，以TelMV侵染性克隆质粒pPasFru为模板，以HCPro‑F、HCPro‑R、HCProK‑R和HCProK‑F为引物，使用Phusion高保真DNA聚合酶进行扩增，获得大小分别为1278bp和117bp的ab和cd片段，再以ab和cd片段的混合物为模板，获得大小为1359bp的ad片段，再进行PstI、SalI双酶切和连接反应，反应产物转化大肠杆菌DH10B，使HCPro的第181位精氨酸突变为赖氨酸，获得弱毒突变体pPasFru‑R181K；本发明专利技术通过将TelMV HCPro蛋白的第181位精氨酸突变为赖氨酸，获得弱毒疫苗，弱毒疫苗接种百香果植株后不表现症状但病毒含量仍较高，该弱毒疫苗作用稳定，可以起到有效的交叉保护作用，为田间防控TelMV提供了新途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体地说是一种抗夜来香花叶病毒的弱毒疫苗r181k及其应用。

技术介绍

1、百香果又名西番莲，经济效益较高，其产业已成为我国多地培育的优势特色，百香果病毒病是影响百香果产业发展的主要因素，而夜来香花叶病毒在我国检出率最高，发生最为普遍；

2、telmv属于马铃薯y病毒科马铃薯y病毒属病毒，百香果被telmv感染后，会表现出叶片扭曲、失绿和花叶，以及果实着色不均匀、小果等症状，严重影响百香果的产量和品质，但目前生产上没有能有效抗telmv的百香果品种，也缺少有效的抗病毒制剂，能够提供有效交叉保护作用的且稳定的弱毒疫苗是迫切需要的；

3、交叉保护是指利用病毒的弱毒株系来对植物进行预免疫，以防止相同或密切相关病毒的强毒株系再次侵染的现象，但目前还没有利用交叉保护抵抗telmv侵染的相关报道。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种抗夜来香花叶病毒的弱毒疫苗r181k及其应用，以解决
技术介绍
中所提到的问题。

2、第一方面，本专利技术提供了一种本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种弱毒疫苗R181 K，其特征在于：以TelMV侵染性克隆质粒pPasFru为模板，以HCPro-F、HCPro-R、HCProK-R和HCProK-F为引物，使用Phusion高保真DNA聚合酶进行扩增，获得大小分别为1278bp和117bp的ab和cd片段，再以ab和cd片段的混合物为模板，获得大小为1359bp的ad片段，再进行PstI、SalI双酶切和连接反应，反应产物转化大肠杆菌DH10B，使HCPro的第181位精氨酸突变为赖氨酸，获得弱毒突变体pPasFru-R181 K。

2.如权利要求1所述一种弱毒疫苗R181K，其特征在于：所述引物HCPro-F为A...

【技术特征摘要】

1.一种弱毒疫苗r181 k，其特征在于：以telmv侵染性克隆质粒ppasfru为模板，以hcpro-f、hcpro-r、hcprok-r和hcprok-f为引物，使用phusion高保真dna聚合酶进行扩增，获得大小分别为1278bp和117bp的ab和cd片段，再以ab和cd片段的混合物为模板，获得大小为1359bp的ad片段，再进行psti、sali双酶切和连接反应，反应产物转化大肠杆菌dh10b，使hcpro的第181位精氨酸突变为赖氨酸，获得弱毒突变体ppasfru-r181 k。

【专利技术属性】
技术研发人员：崔红光，王琳淅，戴兆基，史玮，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：