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【技术实现步骤摘要】
本技术专利技术属于微生物菌种选育,具体涉及一种产甲醇的甲烷氧化菌群的筛选方法。
技术介绍
1、随着全球气候变化的加剧,温室气体减排受到越来越多的研究关注。甲烷是一种温室气体,其温室效应高达二氧化碳的20-30倍之高。天然气是重要的化石能源,其主要成分是甲烷。近年来人为活动造成的甲烷排放持续增多,主要包括农业生产(如水稻种植)、反刍动物饲养、垃圾填埋场、废水处理厂、煤矿开采、化工行业生产、厌氧发酵等。作为能源而言,甲醇的能量密度是甲烷的400倍。作为一种液体燃料,甲醇更容易储存和运输,更容易与汽油混合,适用于当前的多种动力设施,并可以作为多种化工过程的生产原料或燃料。
2、目前化学转换技术能耗大、成本高,不适用于大规模生产应用。而由于甲烷氧化菌在自然界的普遍存在,以及温和的反应条件使生物转换成为一种可能。甲烷氧化菌能够利用甲烷作为唯一的能源和碳源,在生物催化剂甲烷单加氧酶(methane monooxygenase,mmo)催化作用下将甲烷氧化为甲醇。甲烷单加氧酶分为溶解性甲烷单加氧酶(smmo)和颗粒性甲烷单加氧酶(pmmo),不同浓度的铜离子能够诱导不同状态的甲烷单加氧酶的表达。当前,生物甲醇技术所面临的瓶颈问题包括高效产甲醇菌种的匮乏,缺少系统筛选甲烷氧化菌的方法,筛选到的甲烷氧化菌(群)甲醇产率偏低。
技术实现思路
1、为了解决上述问题,本专利技术首先提供了一种产甲醇的甲烷氧化菌群的筛选方法,包括:
2、s1:培养基配制:配制甲烷氧化菌培养液;
...【技术保护点】
1.一种产甲醇的甲烷氧化菌群的筛选方法,包括:
2.根据权利要求1所述的筛选方法,其中,所述甲烷氧化菌培养液为NMS培养液,包含A液和B液;A液包含KH2PO4、Na2HPO4·12H2O、MgSO4·7H2O、(NH4)2SO4;B液包含MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、NaCl、Fe2(SO4)3·7H2O、CaCl2·H2O、ZnSO4·7H2O、KAl(SO4)2·12H2O、H3BO3、Na2MoO4·2H2O、CoCl2·6H2O、NiCl2·6H2O。
3.根据权利要求2所述的筛选方法,其中,所述甲烷氧化菌培养液通过如下方法配制:
4.根据权利要求2或3所述的筛选方法,其中,在B液中,加入CuSO4·5H2O,使得NMS培养液中Cu2+浓度为4μmol/L。
5.根据权利要求1所述的筛选方法,其中,S2中,取水稻田地表下5-10cm土壤。
6.根据权利要求1所述的筛选方法,其中,S3中,接种液静置后,取菌液样品,用光学显微镜观察是否有细菌存在,如果存在,则继续转接培养;如果不存在,则更换稻田地表下土
7.根据权利要求1所述的筛选方法,其中,S3中,所述转接培养中,在新的容器中加入90体积份甲烷氧化菌培养液,转接10体积份静置后的接种液,通入甲烷气体摇床培养获得发酵液。
8.根据权利要求1所述的筛选方法,其中,S3中,摇床培养过程在相对封闭的反应系统中进行。
9.由权利要求1-8中任一项所述的筛选方法获得的产甲醇的甲烷氧化菌群,所述产甲醇的甲烷氧化菌群至少包含Pseudoxanthobacter、Aquabacter、Pandoraea、Geotrichum、Microbacterium、Xanthobacter。
10.权利要求9所述的产甲醇的甲烷氧化菌群在甲醇生产中的应用,其中,产出甲醇浓度为9mM以上。
...【技术特征摘要】
1.一种产甲醇的甲烷氧化菌群的筛选方法,包括:
2.根据权利要求1所述的筛选方法,其中,所述甲烷氧化菌培养液为nms培养液,包含a液和b液;a液包含kh2po4、na2hpo4·12h2o、mgso4·7h2o、(nh4)2so4;b液包含mgso4·7h2o、mnso4·h2o、nacl、fe2(so4)3·7h2o、cacl2·h2o、znso4·7h2o、kal(so4)2·12h2o、h3bo3、na2moo4·2h2o、cocl2·6h2o、nicl2·6h2o。
3.根据权利要求2所述的筛选方法,其中,所述甲烷氧化菌培养液通过如下方法配制:
4.根据权利要求2或3所述的筛选方法,其中,在b液中,加入cuso4·5h2o,使得nms培养液中cu2+浓度为4μmol/l。
5.根据权利要求1所述的筛选方法,其中,s2中,取水稻田地表下5-10cm土壤。
6.根据...
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