【技术实现步骤摘要】
本申请涉及多肽合成领域，特别涉及一种用于合成trizepatide的组合物及trizepatide的合成方法。
技术介绍
1、trizepatide是一种glp和glp-1双激动剂，其肽序结构如下：h-tyr-aib-glu-gly-thr-phe-thr-ser-asp-tyr-ser-ile-aib-leu-asp-lys-ile-ala-gln-lys(二十烷二酸-rglu-aeea-aeea)-ala-phe-val-gln-trp-leu-ile-ala-gly-gly-pro-ser-ser-gly-ala-pro-pro-pro-ser-nh2。
2、trizepatide可改善β细胞功能，提高胰岛素的敏感性，对初始使用剂量较低且后续剂量增幅较小的患者显示出疗效和耐受性的双重改善。trizepatide的临床数据表明，trizepatide对ⅱ型糖尿病患者的a1c和体重水平可带来有意义的降低，同时该药物也可以治疗其它代谢疾病。
3、由于trizepatide含有39个氨基酸组成，序列较长且肽序里面含有较多的疏水氨基酸，若采用单个氨基酸逐步缩合的方法合成时，生产周期较长，随着合成的过程中肽链不断增长，容易产生缺失肽，导致杂质增加，且这些缺失肽的杂质与产物的性质比较相似，导致合成得到的trizepatide粗品在后期的纯化过程中困难。造成收率低。
4、因此，开发一种收率高，周期短，杂质少的trizepatide合成方法具有重要的现实意义。
技术实现思路b>
1、为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本申请提供了一种新的用于合成trizepatide的组合物及trizepatide合成方法来解决现有合成过程中所存在的杂质多，纯度和收率低，不利于后续进一步工业化放大的生产问题。
2、第一方面，本申请提供了一种用于合成trizepatide的组合物，其包括第一肽片段和第二肽片段，其中，第一肽片段为fmoc-x-ile-aib-leu-y-oh（seq id no:1），第二肽片段为boc-z-aib-w-gly-oh，
3、其中，x代表具有侧链保护基tbu的ser（ser(tbu)），y代表具有侧链保护基otbu的asp（asp(otbu)），z代表具有侧链保护基tbu的tyr（tyr(tbu)），w代表具有侧链保护基otbu的glu（glu(otbu)）。
4、在一些实施方式中，x代表ser(tbu)。在一些实施方式中，y代表asp(otbu)。在一些实施方式中，z代表tyr(tbu)。在一些实施方式中，w代表glu(otbu)。
5、在一些实施方式中，所述组合物还包括氨基酸fmoc-(hmb)gly-oh，氨基酸fmoc-lys(dde)-oh和/或肽链c20-otbu-rglu(otbu)-aeea-aeea-oh，c20代表二十烷二酸。
6、在一些实施方式中，第一肽片段的合成包括：以ctc树脂为起始树脂，通过固相合成方法，在所述ctc树脂上依次偶联具有n端fmoc保护的氨基酸，得到具有如下结构的fmoc-x-ile-aib-leu-y-第一肽树脂，将所述第一肽树脂进行酸解，纯化，得到第一肽片段fmoc-x-ile-aib-leu-y-oh，其中x和y具有本文所述的定义。
7、在一些实施方式中，第二肽片段的合成包括：以ctc树脂为起始树脂，通过固相合成方法，在所述ctc树脂上依次偶联具有n端fmoc保护的氨基酸，得到具有如下结构的boc-z-aib-w-gly-第二肽树脂，将所述第二肽树脂进行酸解，纯化，得到第二肽片段boc-z-aib-w-gly-oh。
8、在一些实施方式中，第一肽片段的合成中，所述ctc树脂的摩尔量与所述n端fmoc保护的氨基酸的总摩尔量的比值为1:(2-3)，例如为1:2.1、1:2.2、1:2.3、1:2.4、1:2.5、1:2.6、1:2.7、1:2.8、1:2.9或它们之间的任意值。
9、在一些实施方式中，第二肽片段的合成中，所述ctc树脂的摩尔量与所述n端fmoc保护的氨基酸的总摩尔量的比值为1:(2-3)，例如为1:2.1、1:2.2、1:2.3、1:2.4、1:2.5、1:2.6、1:2.7、1:2.8、1:2.9或它们之间的任意值。
10、在一些实施方式中，第一肽片段和的第二肽片段合成中，偶联的缩合剂选自n,n-二异丙基碳二亚胺（dic）、1-羟基苯并三唑（hobt）、o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯（hbtu）、n,n-二异丙基乙胺（diea）、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷（pybop）和n,n-二异丙基乙胺（diea）中的一种或多种。
11、在一些实施方式中，第一肽片段和的第二肽片段合成中，采用的溶剂选自二氯甲烷（dcm）、n,n-二甲基甲酰胺（dmf）和n-甲基吡咯烷酮（nmp）中的一种或多种。
12、在一些实施方式中，第一肽片段和的第二肽片段合成中，反应中采用的fmoc脱除试剂为哌啶/n,n-二甲基甲酰胺溶液。
13、在一些实施方式中，第一肽片段和的第二肽片段合成中，酸解时采用的为三氟乙酸/二氯甲烷溶液。在一些实施方式中，三氟乙酸/二氯甲烷溶液中，三氟乙酸的体积含量为0.5%-3%，例如为0.7%、0.9%、1.0%、1.3%、1.5%、1.7%、2.0%、2.3%、2.5%或2.7%。在一些实施方式中，酸解时采用的为1%三氟乙酸/二氯甲烷溶液（v/v）。
14、在一些实施方式中，第一肽片段的合成包括以下具体步骤：
15、（1）将ctc树脂加入到固相合成反应器中，加入dmf溶胀树脂，随后将fmoc-asp(otbu)-oh溶于dmf并加入diea后混匀加入到固相反应器中，反应，抽干，dmf洗涤4次。加入dmf后继续加入甲醇及diea继续反应，抽干，dmf洗涤。
16、固相反应器中肽树脂用20%哌啶/dmf（v/v）溶液脱fmoc两次，完成后dmf洗涤，茚三酮检测结果呈阳性。称取fmoc-leu-oh和hobt溶于dmf并加入dic活化，活化后将溶液加入到固相反应器中进行反应，茚三酮检测结果呈阴性，抽干，洗涤。
17、重复上述步骤，按照肽序偶联剩余氨基酸，得到片段1：fmoc-x-ile-aib-leu-y-oh肽树脂 ；
18、（2）上述肽树脂用1%tfa/dcm反应，过滤，收集滤液，加入纯化水萃取，得到有机层滤液加入无水硫酸钠干燥，过滤得到滤液后浓缩至干得到片段1：fmoc-x-ile-aib-leu-y-oh。
19、在一些实施方式中，第二肽片段的合成包括以下具体步骤：
20、（1）将ctc树脂加入到固相合成反应器中，加入dmf溶胀树脂，随后将fmoc-gly-oh溶于dmf并加入diea后混匀加入到固相反应器中，反应，抽干，dmf洗涤。加入dmf后继续加入甲醇及diea继续反应本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于合成Trizepatide的组合物，其包括第一肽片段和第二肽片段，其中第一肽片段为Fmoc-X-Ile-Aib-Leu-Y-OH（SEQ ID NO:1），第二肽片段为Boc-Z-Aib-W-Gly-OH，
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括氨基酸Fmoc-(Hmb)Gly-OH，氨基酸Fmoc-Lys(Dde)-OH和/或肽链C20-OtBu-rGlu(OtBu)-AEEA-AEEA-OH，C20代表二十烷二酸；和/或
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，第一肽片段的合成中，所述CTC树脂的摩尔量与所述N端Fmoc保护的氨基酸的总摩尔量的比值为1:(2-3)；和/或
4.一种Trizepatide的合成方法，其采用权利要求1-3中任一项所述的组合物，包括以下步骤：
5. 根据权利要求4所述的合成方法，其特征在于，所述氨基树脂选自Rink AM树脂、Rink MBHA树脂和Rink Amide AM树脂中的一种或多种；和/或
6. 根据权利要求4或5所述的合成方法，其特征在于
7. 根据权利要求4所述的合成方法，其特征在于，
8. 根据权利要求7所述的合成方法，其特征在于，步骤S6中，所述裂解液由三氟乙酸、三异丙基硅烷、苯酚和水组成，其中，三氟乙酸、三异丙基硅烷、苯酚和水的体积比为(90-95):(2-5):(1-3):(1-3)；和/或
...【技术特征摘要】
1.一种用于合成trizepatide的组合物，其包括第一肽片段和第二肽片段，其中第一肽片段为fmoc-x-ile-aib-leu-y-oh（seq id no:1），第二肽片段为boc-z-aib-w-gly-oh，
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括氨基酸fmoc-(hmb)gly-oh，氨基酸fmoc-lys(dde)-oh和/或肽链c20-otbu-rglu(otbu)-aeea-aeea-oh，c20代表二十烷二酸；和/或
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，第一肽片段的合成中，所述ctc树脂的摩尔量与所述n端fmoc保护的氨基酸的总摩尔量的比值为1:(2-3)；和/或...
【专利技术属性】
技术研发人员：骆亚，李广华，伍月龄，
申请(专利权)人：深圳佳肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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