一种将聚唾液酸合成大肠杆菌经基因改造为产唾液酸乳糖的方法技术

技术编号:42820137 阅读:45 留言:0更新日期:2024-09-24 20:58
本发明专利技术公开了一种将聚唾液酸合成大肠杆菌经基因改造为产唾液酸乳糖的方法,属于生物工程技术领域。方法包括:敲除大肠杆菌中的Neu5Ac α‑2,8‑唾液酸转移酶(NeuS)基因,导入唾液酸转移酶基因。通过设计引物扩增NeuS基因的sgRNA序列,得到pTargetF‑sgRNA质粒;利用融合PCR制备重组同源臂片段,转化大肠杆菌并制作感受态细胞,进行电转化获得阳性敲除子。通过添加IPTG和高温培养,消除pTargetF‑sgRNA质粒和pCAS质粒,得到纯净的基因编辑菌株。本方法提高了基因编辑效率和稳定性,实现了高效生产唾液酸乳糖,为其工业化生产提供了新途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程,特别是涉及一种将聚唾液酸合成大肠杆菌经基因改造为产唾液酸乳糖的方法


技术介绍

1、聚唾液酸(polysialic acid, psa)是一种由多聚唾液酸分子通过α-2,8糖苷键连接形成的多糖,其在生物医学领域具有重要的应用价值,尤其在神经保护、抗炎、抗肿瘤等方面具有显著的效果。唾液酸(sialic acid, sa)及其衍生物是许多生物分子的重要组成部分,参与细胞识别、信号转导和免疫调节等多种生物过程。唾液酸乳糖(sialyllactose,sl)是一种含有唾液酸的低聚糖,在婴儿营养、免疫调节和肠道健康等方面具有重要的作用。

2、目前,唾液酸和唾液酸乳糖的工业生产主要依赖于动物来源,存在成本高、产量低和污染环境等问题。因此,利用微生物发酵生产唾液酸及其衍生物成为一种具有潜力的替代方法。大肠杆菌(escherichia coli)作为一种常见的工业微生物,具有生长快、遗传操作简便等优点,被广泛用于多种生物制品的生产。然而,野生型大肠杆菌中唾液酸及其衍生物的合成效率较低,难以满足工业化生产的需求。>

3、近年来,本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种将聚唾液酸合成大肠杆菌经基因改造为产唾液酸乳糖的方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:其中所述敲除NeuS基因的方法包括以下步骤:

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:其中进一步消除pTargetF-sgRNA质粒,包括以下步骤:

4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:其中进一步消除pCAS质粒,包括以下步骤:

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:其中所述唾液酸转移酶基因导入基因编辑后的聚唾液酸合成大肠杆菌的方法包括:

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:其中所...

【技术特征摘要】

1.一种将聚唾液酸合成大肠杆菌经基因改造为产唾液酸乳糖的方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:其中所述敲除neus基因的方法包括以下步骤:

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:其中进一步消除ptargetf-sgrna质粒,包括以下步骤:

4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:其中进一步消除pcas质粒,包括以下步骤:

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:其中所述唾液酸转移酶基因导入基因编辑后的聚唾液酸合成大肠杆菌的方法包括:

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:其中所述重组大肠杆菌在lb培养基中过夜培养后,以5%(v/v)比例接种至...

【专利技术属性】
技术研发人员:朱德强李昊甄庚尧常化难刘新利李宁宁占国曹建帮高学秀魏田慧陈又铭周焕霞
申请(专利权)人:齐鲁工业大学山东省科学院
类型:发明
国别省市:

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