一种在单核苷酸精度水平上检测低丰度ac4C RNA的测序技术制造技术

本发明专利技术提供了一种在单核苷酸精度水平上检测低丰度ac4C RNA的测序技术。本发明专利技术使用优化的ac4C‑seq方法，可以以50ng的RNA起始量进行NaCNBH<subgt;3</subgt;化学反应。进一步地，该方法可以联合NH<subgt;2</subgt;OH去乙酰化处理作为阴性对照，可以大大降低假阳性的效果。更进一步地，发明专利技术人利用ac4C抗体富集ac4C修饰的RNA，再进行NaCNBH<subgt;3</subgt;化学反应，建库和测序。通过两种方法结合，本发明专利技术实现了以低起始量、高分辨率、高效率和高通量的优点检测到更多低丰度ac4C修饰的RNA。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，特别涉及一种在单核苷酸精度水平上检测低丰度ac4crna的测序技术。

技术介绍

1、rna修饰对人类疾病发生发展有着关键作用。n4-乙酰胞苷(ac4c)是一种高度保守的rna修饰。早期的ac4c研究大多集中在trna和rrna的观察上，但近年来，在人类上发现ac4c调节mrna生命周期的多个步骤，包括加工、衰变和翻译；然而，其生物学功能尚不清楚。因此，迫切需要找到能够识别及鉴定mrna的ac4c修饰位点的技术。由于抗体技术的发展，基于ac4c抗体的acrip-seq方法得以研究。该方法可以富集与ac4c抗体结合的分子。但是由于抗体的特异性和细胞内复合物的复杂性，使得这个方法存在一定缺陷。所以需要开发效率更高的技术。2020年，sas-chen a等人发现在酸性条件下，ac4c与氰基硼氢化钠(nacnbh3)反应形成了还原核碱基n4-乙酰四氢胞嘧啶。与ac4c相比，这种还原核碱基的改变结构会导致逆转录过程中非配对的脱氧核苷酸三磷酸酯(dntps)的插入，可以通过cdna测序检测到(pmid:32555463)。而这种方法仍然存在低效率的缺本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种在单核苷酸精度水平上检测低丰度ac4C RNA的测序技术，其特征在于：包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的在单核苷酸精度水平上检测低丰度ac4C RNA的测序技术，其特征在于：

3.根据权利要求2所述的在单核苷酸精度水平上检测低丰度ac4C RNA的测序技术，其特征在于：

4.根据权利要求3所述的在单核苷酸精度水平上检测低丰度ac4C RNA的测序技术，其特征在于：

5.根据权利要求1所述的在单核苷酸精度水平上检测低丰度ac4C RNA的测序技术，其特征在于：

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【技术特征摘要】

1.一种在单核苷酸精度水平上检测低丰度ac4c rna的测序技术，其特征在于：包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的在单核苷酸精度水平上检测低丰度ac4c rna的测序技术，其特征在于：

3.根据权利要求2所述的在单核苷酸精度水平上检测低丰度ac4c rna的测序技术，其特征在于：

4.根据权利要求3所述的在单核苷酸精度水平上检测低丰度ac4c rna的测序技术，其特征在于：

5.根据权利要求1所述的在单核苷酸精度水平上检测低丰度ac4c rna的测序技术，其特征在于：

【专利技术属性】
技术研发人员：李斌，许雯雯，余小梅，
申请(专利权)人：广州医科大学，
类型：发明
国别省市：