基于荧光定量PCR法检测幽门螺杆菌HtrA分型的引物探针组合物、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及基于荧光定量PCR法检测幽门螺杆菌HtrA分型的引物探针组合物、试剂盒及其应用。本发明专利技术的试剂盒，包括引物探针组合物、4×Multiplex PCR Buffer、DNA聚合酶、阳性对照品和阴性对照品。本试剂盒基于实时荧光定量PCR平台，采用突变阻滞扩增技术(ARMS‑PCR)来检测基因的特定突变。在检测过程中ARMS引物与野生型模板不能结合延伸，因此不能切割taqman探针，不产生荧光。而与突变型模板可以进行延伸反应，从而切割taqman探针产生荧光，检测出含有基因突变。该检测方法具有灵敏度高、准确度高、特异性好和抗干扰能力强等优点，对医生的诊断提供了重要的参考价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，特别涉及基于荧光定量pcr法检测幽门螺杆菌htra分型的引物探针组合物、试剂盒及其应用。

技术介绍

1、幽门螺杆菌(helicobacter pylori，hp)是一种生存于人体胃部的革兰氏阴性微量需氧细菌。1994年世界卫生组织(who)将hp定义为i类致癌原。2021年美国卫生及公共服务部将hp列为明确致癌物。有研究认为，90％左右的胃癌可归因于幽门螺杆菌的感染。然而，全球约50％的人感染了幽门螺杆菌，但是感染者终身罹患胃癌的风险为1-5％。近期著名期刊《细胞》子刊发表了一项hp变异位点促进胃癌发生的研究，其中幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶htra中一个碱基的替换，会导致第171位氨基酸从丝氨酸变成亮氨酸(171s→l)，蛋白水解活性提高了3-5倍，与胃癌的发生显著相关。幽门螺杆菌的171l变异会导致更严重的胃上皮损伤，让幽门螺杆菌更容易钻进胃上皮的深部，注入毒素和促炎的能力更强，还会促进宿主胃上皮细胞的dna双链断裂。这一系列反应，会损害基因组的完整性，并增加有害突变的频率，最终导致上皮细胞癌变。所以对于幽门螺杆菌感染者，分型检测为根治性本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于荧光定量PCR法检测幽门螺杆菌HtrA分型的的引物探针组合物，其特征在于，所述的组合物包括针对幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶HtrA的171S→L突变位点的引物探针组合、针对幽门螺杆菌23S rRNA基因的引物探针组合和针对人β-球蛋白保守序列的引物探针组合，所述的引物探针组合物序列如下：

2.一种基于荧光定量PCR法检测幽门螺杆菌HtrA分型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒至少包括如权利要求1所述的引物探针组合物、4×Multiplex PCR Buffer、DNA聚合酶、阳性对照品和阴性对照品。

3.根据权利要求2所述的基于荧光定量PCR法检测幽门螺杆菌H...

【技术特征摘要】

1.一种基于荧光定量pcr法检测幽门螺杆菌htra分型的的引物探针组合物，其特征在于，所述的组合物包括针对幽门螺杆菌丝氨酸蛋白酶htra的171s→l突变位点的引物探针组合、针对幽门螺杆菌23s rrna基因的引物探针组合和针对人β-球蛋白保守序列的引物探针组合，所述的引物探针组合物序列如下：

2.一种基于荧光定量pcr法检测幽门螺杆菌htra分型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒至少包括如权利要求1所述的引物探针组合物、4×multiplex pcr buffer、dna聚合酶、阳性对照品和阴性对照品。

3.根据权利要求2所述的基于荧光定量pcr法检测幽门螺杆菌htra分型的试剂盒，其特征在于，所述4×multiplex pcr buffer包括mgcl2和dntps。

4.根据权利要求2所述的基于荧光定量pc...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈阳光，陈胜兰，张笑晗，焦志军，王春香，
申请(专利权)人：江苏康为世纪生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：