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【技术实现步骤摘要】
本申请涉及核酸提取,具体涉及一种核酸提取或纯化试剂、试剂盒及核酸提取或纯化方法。
技术介绍
1、核酸提取是核酸检测中必不可少的环节,要确保核酸检测结果的准确性,重复性和稳定性,首先要确保得到高质量的核酸。其中,磁珠法提取核酸因其能实现高通量、自动化操作,且具有操作简单,安全无毒等优点,现已得到广泛应用。
2、磁珠法提取核酸的原理是运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后,制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠,该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合,在外加磁场的作用下,使磁性颗粒与液体分开,弃除液体后,再经洗脱得到纯化的核酸分子。
3、在磁珠法提取核酸方法中,是以胍盐等组分替代蛋白酶k,从而将核酸和蛋白分离。但是该方法中,核酸的提取浓度和/或纯度相对较低,难以实现高纯度、高浓度核酸的提取。
4、因此,提供一种高浓度核酸的提取或纯化试剂具有重要意义。
技术实现思路
1、本申请实施例的目的在于提供一种核酸提取或纯化试剂、试剂盒及核酸提取或纯化方法。
2、为实现上述目的,本申请提出以下技术方案:
3、本申请实施例第一方面提供了一种核酸提取或纯化试剂,所述试剂包括:
4、结合液;
5、吸附柱;以及
6、洗脱液;
7、所述结合液包括异硫氰酸胍;
8、所述吸附柱为硅胶膜吸附柱。
9、作为一种实施方式,所述异硫氰酸胍的浓度为0.2~0.3g/ml
10、作为一种实施方式,所述试剂还包括缓冲液;
11、所述缓冲液包括氢氧化钠,所述氢氧化钠的浓度为0.1~0.2g/ml。
12、作为一种实施方式,所述试剂还包括转化液;
13、所述转化液包括亚硫酸氢钠和对苯二酚,所述亚硫酸氢钠和对苯二酚的比例为55~65:1。
14、作为一种实施方式,所述试剂还包括漂洗液;所述漂洗液为乙醇溶液。
15、本申请实施例第二方面提供了一种核酸提取或纯化试剂盒,所述试剂盒包括第一方面所述的试剂。
16、本申请实施例第三方面提供了一种核酸提取或纯化方法,所述方法包括:
17、细胞样本发生dna变性和亚硫酸氢盐转化反应,得到反应液;
18、含有结合液的吸附柱吸附反应液中的dna,得到吸附dna的吸附柱;
19、对吸附dna的吸附柱进行脱磺、洗脱处理,收集得到转化dna;
20、其中,所述结合液包括异硫氰酸胍;所述吸附柱为硅胶膜吸附柱。
21、作为一种实施方式,所述细胞样本发生dna变性和亚硫酸氢盐转化反应,得到反应液,包括:
22、细胞样本中加入缓冲液和转化液,使细胞样本发生dna变性和亚硫酸氢盐转化反应,得到反应液;
23、其中,所述缓冲液包括氢氧化钠,所述氢氧化钠的浓度为0.1~0.2g/ml;所述转化液包括亚硫酸氢钠和对苯二酚,所述亚硫酸氢钠和对苯二酚的比例为55~65:1。
24、作为一种实施方式,所述含有结合液的吸附柱吸附反应液中的dna,得到吸附dna的吸附柱,包括:
25、向吸附柱中加入结合液,混合均匀后得到含有结合液的吸附柱;
26、含有结合液的吸附柱吸附反应液中的dna,得到吸附dna的吸附柱;
27、所述结合液中异硫氰酸胍的浓度为0.2~0.3g/ml。
28、作为一种实施方式,所述对吸附dna的吸附柱进行脱磺、洗脱处理,收集得到转化dna,包括:
29、向吸附dna的吸附柱加入漂洗液和脱磺液,得到除杂后的吸附柱;
30、向除杂后的吸附柱中加入洗脱液,收集得到转化dna;
31、其中,所述漂洗液为乙醇溶液;所述洗脱液包括:0.5~1m tris-hcl、0.5~1medta。
32、本申请实施例至少具有以下有益效果:
33、本申请实施例提供的核酸提取或纯化试剂,能特异性吸附dna,而rna与蛋白质能穿过,从而实现dna的高效提取或纯化。
34、本申请附加的方面和优点将在下面的描述中部分给出,这些将从下面的描述中变得明显,或通过本申请的实践了解到。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种核酸提取或纯化试剂,其特征在于,所述试剂包括:
2.根据权利要求1所述的核酸提取或纯化试剂,其特征在于,所述异硫氰酸胍的浓度为0.2~0.3g/mL;所述洗脱液包括:0.5~1M Tris-HCl、0.5~1M EDTA。
3.根据权利要求1或2所述的核酸提取或纯化试剂,其特征在于,所述试剂还包括缓冲液;
4.根据权利要求1所述的核酸提取或纯化试剂,其特征在于,所述试剂还包括转化液;
5.根据权利要求1所述的核酸提取或纯化试剂,其特征在于,所述试剂还包括漂洗液;所述漂洗液为乙醇溶液。
6.一种核酸提取或纯化试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1~5任一项所述的核酸提取或纯化试剂。
7.一种核酸提取或纯化方法,其特征在于,所述方法包括:
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述细胞样本发生DNA变性和亚硫酸氢盐转化反应,得到反应液,包括:
9.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述含有结合液的吸附柱吸附反应液中的DNA,得到吸附DNA的吸附柱,包括:
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【技术特征摘要】
1.一种核酸提取或纯化试剂,其特征在于,所述试剂包括:
2.根据权利要求1所述的核酸提取或纯化试剂,其特征在于,所述异硫氰酸胍的浓度为0.2~0.3g/ml;所述洗脱液包括:0.5~1m tris-hcl、0.5~1m edta。
3.根据权利要求1或2所述的核酸提取或纯化试剂,其特征在于,所述试剂还包括缓冲液;
4.根据权利要求1所述的核酸提取或纯化试剂,其特征在于,所述试剂还包括转化液;
5.根据权利要求1所述的核酸提取或纯化试剂,其特征在于,所述试剂还包括漂洗液;所述漂洗液为乙醇溶液。
<...【专利技术属性】
技术研发人员:莫秋香,邵建永,李创强,符聪,
申请(专利权)人:广州达健生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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