用于AIS诊断的生物标志物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物标志技术领域，公开了用于AIS诊断的生物标志物，包括CILP‑1和ACTC中的一种或多种，用于AIS诊断的生物标志物的筛选方法，所述筛选方法具体包括以下步骤：获取AIS患者血浆样本以及健康人群的血浆样本作为对比；获取AIS患者肌肉组织；对血浆外泌体进行富集；对血浆外泌体形态、粒径大小进行鉴定；对外泌体标志性蛋白进行鉴定；提取外泌体蛋白；将外泌体蛋白切割成肽段。本发明专利技术采用CILP‑1和ACTC作为AIS患者血浆细胞外囊泡早期诊断的生物标记物，受到血浆高峰度蛋白的影响较小，解决了现有技术采用血浆蛋白质组学进行差异蛋白和生物标记物的筛选，而血浆蛋白来源复杂，且血浆中存在大量的高峰度蛋白，可能影响低丰度蛋白的检测质量的问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物标志，尤其涉及用于ais诊断的生物标志物及其应用。

技术介绍

1、青少年特发性脊柱侧弯(adolescent idiopathic scoliosis，ais)是是青春发育期最常见的三维结构畸形，全世界发病率为全球发病率为1％-4％。女孩的发病率高于男孩。ais是脊柱多个椎体结构三维空间的异常生长发育，包括矢状面的平背畸形，冠状面的侧弯和轴位的旋转畸形。不同于病因明确的神经肌肉型脊柱侧弯、先天性脊柱侧弯等，ais患者发病机制仍有待进一步明确，目前研究倾向于ais是多种内在因素及外部环境改变的共同作用导致。为了制定更有效的预后和治疗方法，目前非常需要对尚未探索的领域进行研究，进一步明确ais的病因学将为临床的诊断和治疗提供更为可靠的依据。

2、为阐明ais的发病机制，研究人员采取了多种的研究方法和技术来发掘ais患者存在的异常，包括全基因组测序及家系基因遗传，激素水平测定，蛋白质组学，代谢组学，生物力学，有限元分析及动物模型等。而肌肉的纤维类型，细胞外基质以及肌肉结构的异常在ais椎旁肌肉中已经得到证实。在近期的一项研究中，通过本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.用于AIS诊断的生物标志物，其特征在于：包括CILP-1和ACTC中的一种或多种。

2.蛋白质用于AIS诊断的生物标志物的用途，其特征在于：所述蛋白质包括CILP-1和ACTC中的一种或多种。

3.用于AIS诊断的生物标志物的筛选方法，其特征在于：所述筛选方法具体包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的用于AIS诊断的生物标志物的筛选方法，其特征在于：获取AIS患者肌肉组织的具体过程为：取术中AIS患者(n＝10)侧弯顶椎双侧(凸侧和凹侧)深部多裂肌肌肉组织各一块，大小约1cm×1cm×1cm，将肌肉组织放入4％多聚甲醛中固定24h用做石蜡切片。<...

【技术特征摘要】

1.用于ais诊断的生物标志物，其特征在于：包括cilp-1和actc中的一种或多种。

2.蛋白质用于ais诊断的生物标志物的用途，其特征在于：所述蛋白质包括cilp-1和actc中的一种或多种。

3.用于ais诊断的生物标志物的筛选方法，其特征在于：所述筛选方法具体包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的用于ais诊断的生物标志物的筛选方法，其特征在于：获取ais患者肌肉组织的具体过程为：取术中ais患者(n＝10)侧弯顶椎双侧(凸侧和凹侧)深部多裂肌肌肉组织各一块，大小约1cm×1cm×1cm，将肌肉组织放入4％多聚甲醛中固定24h用做石蜡切片。

5.根据权利要求4所述的用于ais诊断的生物标志物的筛选方法，其特征在于：所述对血浆外泌体进行富集的具体过程为：通过0.2μm滤膜去除700μl血浆中的细胞碎片、微囊泡和凋亡小体等；加tio2微球10mg，4℃，振荡孵育5min；500μl pbs洗涤3次后，离心，去除上清并收集tio2微球沉淀，其表面富集有血浆外泌体。

6.根据权利要求5所述的用于ais诊断的生物标志物的筛选方法，其特征在于：所述对血浆外泌体形态、粒径大小进行鉴定的具体过程为：

7.根据权利要求6所述的用于ais诊断的生物标志物的筛选方法，其特征在于：所述将外泌体蛋白切割成肽段的具体过程为：

8.根据权利要求7所述的用于ais诊断的生物标志物的筛选方法，其特征在于：所述液相分离，以及质谱检测技术定性及定量分析样品中的蛋白质的具体过程为：样品先经纳升级液相在线分离后再检测，数据的采集方式采用数据非依赖型扫描模式(dia，dataindep...

【专利技术属性】
技术研发人员：王琦，王驰，张雪松，王成彬，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第一医学中心，
类型：发明
国别省市：