一种慢病毒的纯化方法技术

本申请提供了一种慢病毒的纯化方法，包括以下步骤：制作层析柱填料；制备慢病毒样液；采用磷脂亲和层析和VSVG假型亲和层析的双亲和方法对慢病毒进行纯化。与现有技术相对比，本申请具有以下优点：本发明专利技术提供的慢病毒纯化方法，采用磷脂亲和纯化，选用大流速基质可以将流速提升至2‑8CV/min，纯化速度快，单步收率70％，结合VSVG假型亲和，纯度可以达95％以上，整体收率可达到30‑45％；本申请将基质与能够结合细胞膜的跨膜多肽连接，对上述带有磷脂双分子层表面的配基进行特异性吸附，通过EDTA或NaCl浓度将纯化目标分子解析附出来，简化了纯化工艺，缩短了纯化时间，提升了纯化度和收率。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及病毒纯化，具体涉及一种慢病毒的纯化方法。

技术介绍

1、慢病毒(lvv)作为细胞与基因治疗领域最重要的载体，与其他逆转录病毒相比，慢病毒有其独特的优点：有更广泛的宿主，对于分裂和非分裂细胞均具有感染能力。对于一些较难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，能大大提高目的基因转导效率，使目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加；稳定表达，慢病毒可以将外源基因有效的整合到细胞染色体中，且目的基因对转录沉默作用有一定的抵抗能力，可以在靶细胞中得到持续高效稳定的表达。经过构建后的慢病毒载体可以携带大约5kb，甚至更长的目的基因。因此除了外源的short-hairpin rnas(shrnas)等小分子外，很多cdna也能被克隆进入慢病毒载体，当然随着目的基因长度的增加，其病毒滴度也会随之下降。基于慢病毒的优点，可以利用慢病毒载体系统进行转染目的基因或rnai基因的常规实验操作，同时慢病毒在基因编辑、基因治疗、转基因动物、药物研究等领域也发挥着重要作用。

2、lvv通常是来自hiv-1的改造，并具有许多相同的特征，如直径80-120n本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种慢病毒的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的慢病毒的纯化方法，其特征在于，所述步骤S1中，层析柱填料的制备方法具体为，先制备所需要的基质，并对基质进行亲水化改造，再采用马来酰胺类或其他试剂进行活化，与带有间隔臂和连接子的配基进行偶联即可。

3.根据权利要求2所述的慢病毒的纯化方法，其特征在于，所述基质包括天然大分子糖类、高分子聚合物、无机材料以及复合材料中的一种或多种；所述天然大分子糖类优选为琼脂糖、葡聚糖或纤维素；所述高分子聚合物优选为甲基丙烯酸类聚合物、苯乙烯二乙烯苯聚合物、环氧树脂类聚合物或聚醚砜类聚合物；所述无机材料优选为...

【技术特征摘要】

1.一种慢病毒的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的慢病毒的纯化方法，其特征在于，所述步骤s1中，层析柱填料的制备方法具体为，先制备所需要的基质，并对基质进行亲水化改造，再采用马来酰胺类或其他试剂进行活化，与带有间隔臂和连接子的配基进行偶联即可。

3.根据权利要求2所述的慢病毒的纯化方法，其特征在于，所述基质包括天然大分子糖类、高分子聚合物、无机材料以及复合材料中的一种或多种；所述天然大分子糖类优选为琼脂糖、葡聚糖或纤维素；所述高分子聚合物优选为甲基丙烯酸类聚合物、苯乙烯二乙烯苯聚合物、环氧树脂类聚合物或聚醚砜类聚合物；所述无机材料优选为二氧化硅或氧化铝；所述复合材料优选为磁珠。

4.根据权利要求2所述的慢病毒的纯化方法，其特征在于，所述亲水化改造是在基质表面进行亲水化修饰，亲水化修饰材料包括但不限于葡聚糖、琼脂糖、纤维素、醋酸纤维素、淀粉、亲水多肽、亲水寡肽、亲水多肽、亲水蛋白质、亲水核酸链、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚丙烯酸、聚丙烯酞胺、聚氨酷和聚肽胺中的一种或多种。

5.根据权利要求2所述的慢病毒的纯化方法，其特征在于，所述配基为能够对目标分子表面的磷脂酰胆碱(pc)、磷脂酰乙醇胺(pe)、磷脂酰丝氨酸(ps)、磷脂酰肌醇(pi)和磷脂酸(pa)进行特异性吸附的基团，或在钙离子存在的情况下与外泌体膜表面的磷酯酰丝氨酸(p...

【专利技术属性】
技术研发人员：邢郁明，夏梦雨，陈晓凌，
申请(专利权)人：无锡萃纯生物材料科技有限公司，
类型：发明
国别省市：