一种用于培养超级记忆NK细胞的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种用于培养超级记忆NK细胞的培养方法，其包括：包被液、激活培养基和扩增培养基；步骤：(1)包被培养；(2)分离纯化NK；(3)接种培养；(4)添加所述激活培养基和血浆；(5)添加所述激活培养基和血浆，加入记忆因子；(6)洗去记忆因子和激活培养基，分离提纯，使用扩增培养基重悬细胞到新的培养瓶内进行培养，添加血浆并继续培养；(7)补充扩增培养基和添加血浆；(8)将培养瓶中的细胞悬液转移到培养袋内，补充扩增培养基和添加血浆；(9)补充扩增培养基和添加血浆；(10)在测定结果达标后进行收集；实现培养出高纯度的NK细胞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及到nk细胞培养，尤其涉及到一种用于培养超级记忆nk细胞的培养方法。

技术介绍

1、自然杀伤细胞(natural killer cells)简称为nk细胞，nk细胞在识别患病细胞后使用两个主要功能来保护宿主，一是产生细胞因子来沟通和协调免疫反应，二是直接杀伤靶细胞。

2、nk细胞能够介导长期的、抗原特异性的适应性记忆反应，如：病毒刺激能使nk细胞产生记忆。细胞因子是激活nk细胞，使其产生免疫记忆的重要手段，在nk细胞的“记忆功能”被确定后，如何获得大量的可用于临床试验或治疗的工程化的记忆样nk细胞，便成为一个待攻坚的难题，而最先采用的是细胞因子的组合，如：细胞因子il-2和il-15可驱动nk细胞分化、增殖和激活。

3、但目前市面上制备的nk细胞纯度大部分相对较低，且在体内容易衰老，因细胞毒性过低，杀伤力较弱，每次输注量基本为50亿，其中由于纯度不佳所以容易造成输注细胞含有其他t细胞，b细胞等杂细胞。

4、因此，亟需一种能够解决以上一种或多种问题的用于培养超级记忆nk细胞的培养方法。>

<本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于培养超级记忆NK细胞的培养方法，其特征在于，包括：包被液，一份所述包被液包含1支包被因子和2ml磷酸盐缓冲液；激活培养基，一份所述激活培养基包含1支激活因子-1、1支激活因子-2和基础培养基；扩增培养基，一份所述扩增培养基包含1支扩增因子-1、1支扩增因子-2和基础培养基；

2.根据权利要求1所述的用于培养超级记忆NK细胞的培养方法，其特征在于，在步骤(1)中：培养瓶处于4摄氏度的温度下进行至少15个小时的培养。

3.根据权利要求1所述的用于培养超级记忆NK细胞的培养方法，其特征在于，在步骤(2)中：全血直接孵育20分钟，然后再加入磷酸盐缓冲液终止孵育...

【技术特征摘要】

1.一种用于培养超级记忆nk细胞的培养方法，其特征在于，包括：包被液，一份所述包被液包含1支包被因子和2ml磷酸盐缓冲液；激活培养基，一份所述激活培养基包含1支激活因子-1、1支激活因子-2和基础培养基；扩增培养基，一份所述扩增培养基包含1支扩增因子-1、1支扩增因子-2和基础培养基；

2.根据权利要求1所述的用于培养超级记忆nk细胞的培养方法，其特征在于，在步骤(1)中：培养瓶处于4摄氏度的温度下进行至少15个小时的培养。

3.根据权利要求1所述的用于培养超级记忆nk细胞的培养方法，其特征在于，在步骤(2)中：全血直接孵育20分钟，然后再加入磷酸盐缓冲液终止孵育。

4.根据权利要求1所述的用于培养超级记忆nk细胞的培养方法，其特征在于，在步骤(3)中：所述纯化nk细胞的数量为4000万，所述激活培养基的用量为40ml，添加的血浆为2ml。

5.根据权利要求1所述的用于培养超级记忆nk细胞的培养方法，其特征在于，在步骤(4)中：添加的所述激活培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷勤伟，武兆刚，张明，廖钰婷，
申请(专利权)人：华研深圳再生医学集团有限公司，
类型：发明
国别省市：