一种ddhd2基因突变的斑马鱼模型的构建方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种ddhd2基因突变的斑马鱼模型的构建方法及其应用，涉及基因工程技术领域，本发明专利技术通过将含有sgRNA、Cas9蛋白的RNP混合液导入斑马鱼受精卵中，并经过筛选培养，创造性地实现了对斑马鱼ddhd2基因的敲除，采用本发明专利技术构建的斑马鱼模型对精神类药物进行筛选，具有检测通量高，检测周期短，检测灵敏度高以及检测载体的伦理限制少的优点，对于快速筛选及评价精神类药物及天然功效因子具有广泛的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程，尤其是涉及一种ddhd2基因突变的斑马鱼的构建方法及其应用。

技术介绍

1、目前，基因编辑技术飞速发展，广泛应用于动物模型的构建、基因功能研究中。crispr/cas9作为一种新型基因编辑技术，具有高位点特异性、设计灵活和易于操作的特点。

2、在生物学基因编辑技术的研究中通常采用兔及大、小鼠等啮齿动物，而构建这类动物模型存在时间较长、成本高、喂养空间需求大和遗传性状不稳定等问题。而斑马鱼作为模式生物优势突出。首先研究表明大约70％的人类基因在斑马鱼中具有功能同源物，其次斑马鱼饲养方便且成本低、胚胎透明、繁殖力强、发育迅速，受精后三天即可发育出较完善的神经系统，5dpf个体基本发育完全。另外通常在神经功能方面，斑马鱼具有与人类同源功能的几个关键脑区。在斑马鱼的神经递质谱中检测到许多重要的神经递质；其表现出较多与人类相似的复杂行为，包括社交、运动、情感和防御等，这对神经科学研究十分重要，在研究人类中枢神经系统药物上有很好的应用前景。

3、ddhd2基因位于人类染色体区域8p11.23，其编码的蛋白质属于哺乳动物胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种ddhd2基因突变的斑马鱼模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的斑马鱼模型的构建方法，其特征在于，步骤1中所述RNP混合液含有sgRNA、Cas9蛋白；

3.根据权利要求2所述的斑马鱼模型的构建方法，其特征在于，所述sgRNA的靶位点位于斑马鱼ddhd2基因的第五外显子。

4.根据权利要求2所述的斑马鱼模型的构建方法，其特征在于，所述sgRNA的靶位点的3’端为NGG。

5.根据权利要求2所述的斑马鱼模型的构建方法，其特征在于，所述sgRNA对应的DNA序列为CACCTAGTGTTCATGGTTCA。<...

【技术特征摘要】

1.一种ddhd2基因突变的斑马鱼模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的斑马鱼模型的构建方法，其特征在于，步骤1中所述rnp混合液含有sgrna、cas9蛋白；

3.根据权利要求2所述的斑马鱼模型的构建方法，其特征在于，所述sgrna的靶位点位于斑马鱼ddhd2基因的第五外显子。

4.根据权利要求2所述的斑马鱼模型的构建方法，其特征在于，所述sgrna的靶位点的3’端为ngg。

5.根据权利要求2所述的斑马鱼模型的构建方法，其特征在于，所述sgrna对应的dna序列为cacctagtgttcatggttca。

【专利技术属性】
技术研发人员：李志强，彭利霞，吴传鸿，王宝堃，常开慧，
申请(专利权)人：青岛大学附属医院，
类型：发明
国别省市：

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