【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体为一种有效去除组织提取物中病毒微生物的方法。
技术介绍
1、随着生物医药技术的日益成熟，越来越多的研究发现，动、植物组织中有很多具有应用价值的组分，例如动植物外泌体、蛋白质组分等。例如肿瘤组织中分离培养免疫细胞可进行自体肿瘤治疗，肿瘤、胎盘组织中提取的外泌体可用于临床诊以及关节疼痛、脑部退行性疾病的缓解治疗等，以及肿瘤、胎盘组织中提取的热休克蛋白等组分蛋白用于实验室诊断试剂以及临床应用等，同时，通过胎盘作为医疗废弃物重新利用提取白蛋白等，用于临床的应急性治疗严重烧伤、严重失血等患者等。虽然这些提取组分均应经过第三方检测机构证明其不含有传染性病原微生物，例如肝炎病毒、巨细胞病毒、梅毒螺旋体、h iv病毒以及真菌、细菌、支原体等，但是这些病原微生物仍有潜在的存在风险，给使用群体带来健康风险。
2、综上所述的问题，为此，我们提出一种有效去除组织提取物中病毒微生物的方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种有效去除组织提取物中病毒微生物的方法，解决了现有的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、一种有效去除组织提取物中病毒微生物的方法，包括以下步骤：
4、(1)组织处理前去除病毒微生物方法
5、(11)β丙内酯孵育
6、将组织浸泡至2-8℃预冷的缓冲体系中，例如pbs或nahco3或tr i s或naac等，待组织解冻后按溶液体积比加入β丙内酯，其中缓冲液体
7、(12)β丙内酯再次孵育
8、待完成步骤(11)操作后，再次按照溶液体积比加入β丙内酯，其中缓冲液体积：β丙内酯为1:10-1:8000，在2-8℃层析柜或冷库中使用摇床进行晃动混匀，处理2-4小时。
9、(13)β丙内酯水解
10、将上述步骤(11)或步骤(12)处理样品静止置于37℃水浴锅中进行β丙内酯试剂的水解，水解处理2小时。
11、(2)组织处理后病毒去除方法
12、(21)peg沉淀法去除病毒微生物的方法
13、将组织进行破碎处理后，对组织破碎液进行高速离心收获离心上清，然后在按照体积比或质量比加入peg，其中peg可为固体也可为配置好的母液，至终浓度为2％及以上，2-8℃搅拌4小时以上进行处理，然后对样品进行高速离心，收获上清即可。
14、(22)β丙内酯去除病毒微生物的方法
15、(221)β丙内酯孵育
16、将组织浸泡至2-8℃预冷的缓冲体系中，例如pbs或nahco3或tr i s或naac等，待组织解冻后按溶液体积比加入β丙内酯，其中缓冲液体积：β丙内酯为1:10-1:8000，在2-8℃层析柜或冷库中使用摇床进行晃动混匀，处理20-24小时。
17、(222)β丙内酯再次孵育
18、待完成步骤(221)操作后，再次按照溶液体积比加入β丙内酯，其中缓冲液体积：β丙内酯为1:10-1:8000，在2-8℃层析柜或冷库中使用摇床进行晃动混匀，处理2-4小时。
19、(223)β丙内酯水解
20、将上述步骤(221)或步骤(222)处理样品静止置于37℃水浴锅中进行β丙内酯试剂的水解，水解处理2小时。
21、(3)组织来源的组分提取过程中进行病毒微生物去除方法
22、(31)peg沉淀法去除病毒微生物的方法
23、组织经破碎离心处理后进行初步的处理，例如深层过滤降低浊度、微滤或者一定孔径的膜包(或中空纤维)超滤等处理后获得的目标料液，进行peg沉淀去除病毒微生物等囊泡结构操作。按照体积比或质量比加入peg，其中peg可为固体也可为配置好的母液，至终浓度为2％及以上，2-8℃搅拌4小时以上进行处理，然后对样品进行高速离心，收获上清即可。
24、(32)β丙内酯去除病毒微生物的方法
25、(321)β丙内酯孵育
26、组织经破碎离心处理后进行初步的料液前处理，例如深层过滤降低浊度、微滤或者一定孔径的膜包(或中空纤维)超滤等处理后获得的目标料液，按溶液体积比加入β丙内酯，其中缓冲液体积：β丙内酯为1:10-1:8000，在2-8℃层析柜或冷库中使用摇床进行晃动混匀，处理20-24小时。
27、(322)β丙内酯再次孵育
28、待完成步骤(321)操作后，再次按照溶液体积比加入β丙内酯，其中缓冲液体积：β丙内酯为1:10-1:8000，在2-8℃层析柜或冷库中使用摇床进行晃动混匀，处理2-4小时。
29、(323)β丙内酯水解
30、将上述步骤(321)或步骤(322)处理样品静止置于37℃水浴锅中进行β丙内酯试剂的水解，水解处理2小时。
31、(33)离子层析去除病毒微生物的方法
32、将料液置换于合适的缓冲体系中，通过调整ph及电导，使目标蛋白组分进行阴离子结合或者阳离子流穿以使得病毒微生物颗粒通过阴离子层析流穿以及阳离子结合等方式进行病毒微生物的去除操作。
33、(4)组织来源的提取组分原液制备前后病毒去除方法
34、(41)peg沉淀法去除病毒微生物的方法
35、组织经破碎、离心、料液前处理及层析纯化等一系列操作后进行病毒微生物的去除操作。对目标料液进行peg沉淀去除病毒微生物等囊泡结构操作。按照体积比或质量比加入peg，其中peg可为固体也可为配置好的母液，至终浓度为2％及以上，2-8℃搅拌4小时以上进行处理，然后对样品进行高速离心，收获上清即可。
36、(42)β丙内酯去除病毒微生物的方法
37、(421)β丙内酯孵育
38、组织经破碎离心处理后进行初步的处理，例如深层过滤降低浊度、微滤或者一定孔径的膜包(或中空纤维)超滤等处理后获得的目标料液，按溶液体积比加入β丙内酯，其中缓冲液体积：β丙内酯为1:10-1:8000，在2-8℃层析柜或冷库中使用摇床进行晃动混匀，处理20-24小时。
39、(422)β丙内酯再次孵育
40、待完成4.2.1)操作后，再次按照溶液体积比加入β丙内酯，其中缓冲液体积：β丙内酯为1:10-1:8000，在2-8℃层析柜或冷库中使用摇床进行晃动混匀，处理2-4小时。
41、(423)β丙内酯水解
42、将上述步骤(421)或步骤(422)处理样品静止置于37℃水浴锅中进行β丙内酯试剂的水解，水解处理2小时。
43、(43)纳米过滤去除病毒微生物的方法
44、将获得的纯化液，该纯化液包括经上述peg或β丙内酯或peg和β丙内酯共同孵育处理除病毒微生物操作后所得产物以及经纯化层析除病毒病原微生物的操作等获取的产物或未经任何除病毒微生物处理所获取的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种有效去除组织提取物中病毒微生物的方法，其特征在于，采用以下方法：
2.根据权利要求1所述的一种有效去除组织提取物中病毒微生物的方法，其特征在于，所述方法(1)，具体包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的一种有效去除组织提取物中病毒微生物的方法，其特征在于，所述缓冲液体积：β丙内酯为1:10-1:8000。
4.根据权利要求1所述的一种有效去除组织提取物中病毒微生物的方法，其特征在于，所述方法(2)，采用PEG沉淀法去除病毒微生物的方法，具体包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的一种有效去除组织提取物中病毒微生物的方法，其特征在于，所述方法(2)，还采用β丙内酯去除病毒微生物的方法，具体包括以下步骤：
6.根据权利要求1所述的一种有效去除组织提取物中病毒微生物的方法，其特征在于，所述方法(3)，采用PEG沉淀法去除病毒微生物的方法，具体包括以下步骤：
7.根据权利要求1所述的一种有效去除组织提取物中病毒微生物的方法，其特征在于，所述方法(3)，还采用β丙内酯去除病毒微生物的方法，具体包括以下步骤：<...
【技术特征摘要】
1.一种有效去除组织提取物中病毒微生物的方法，其特征在于，采用以下方法：
2.根据权利要求1所述的一种有效去除组织提取物中病毒微生物的方法，其特征在于，所述方法(1)，具体包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的一种有效去除组织提取物中病毒微生物的方法，其特征在于，所述缓冲液体积：β丙内酯为1:10-1:8000。
4.根据权利要求1所述的一种有效去除组织提取物中病毒微生物的方法，其特征在于，所述方法(2)，采用peg沉淀法去除病毒微生物的方法，具体包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的一种有效去除组织提取物中病毒微生物的方法，其特征在于，所述方法(2)，还采用β丙内酯去除病毒微生物的方法，具体包括以下步骤：
6.根据权利要求1所述的一种有效去除组织提取物中病毒微生物的方法，其特征在于，所述方法(3)，采...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘二龙，李华楠，熊云芳，
申请(专利权)人：白研会深圳医生集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。