【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞培养，具体涉及一种间充质干细胞无血清培养基及其制备方法和应用。
技术介绍
1、间充质干细胞(mesenchymal stem cells，mscs)，又称多潜能基质细胞，是来自中胚层的一类多能干细胞。在适宜条件下可分化为脂肪、骨、软骨等多种组织细胞，并且具有自我增殖能力、多项分化潜能、低免疫原性、定向迁移和归巢能力及免疫调控等特点。在再生医学和细胞代替治疗等领域都有广阔的应用前景。
2、传统的间充质干细胞的培养方法是使用含有动物血清的培养基培养，主要是为了给间充质干细胞的生长繁殖提供养分如激素、生长因子、转运蛋白等，但是，血清是一种非常复杂的混合物，成分可能多达几百种，目前对其准确的成分、含量及其作用机制仍不清楚，血清各批次之间的质量差别较大，受到生产商原料来源地的影响较大，要保证每批的一致性很困难，不利于实验室研究或产品生产的标准化，血清中可能含有一些未知的或未检测出的支原体、病毒等有害微生物，对细胞产生潜在的影响，并且血清中存在的一些抗体、补体及细菌毒素等物质，也对细胞的生长产生不利影响，甚至造成细胞的死亡。
3、目前市场上提出了些无血清培养基，其主要由基础培养基和取代血清的添加剂成分组成。但现有技术中的无血清培养基存在细胞贴壁性差，组分相对复杂，不支持原代细胞培养等问题。
4、专利cn110923196b公开了一种无血清培养基及其制备方法，培养基包括了非必需氨基酸、谷氨酰胺、氢化可的松、地塞米松，聚乙烯醇、重组人胰岛素，重组人转铁蛋白、重组人表皮生长因子、重组碱性成纤维
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种间充质干细胞无血清培养基及其制备方法和应用。
2、术语：
3、本专利技术中，“bfgf”指碱性成纤维细胞生长因子。
4、本专利技术中，“egf”指表皮生长因子。
5、本专利技术中，“vegf”指血管内皮生长因子。
6、本专利技术中，“tgf-β1”指转化生长因子-β。
7、本专利技术中，“bsa”指牛血清白蛋白。
8、一方面，本专利技术提供了一种间充质干细胞无血清培养基的配方。
9、具体地，所述间充质干细胞无血清培养基成分包括：ultragrotm-advanced、促肾上腺皮质激素、睾酮、5-羟色胺、维生素e、bfgf、egf、vegf、tgf-β1、胰岛素、脂质混合物。
10、具体地，所述无血清培养基各成分浓度为：ultragrotm-advanced 5％，促肾上腺皮质激素100-200nm，睾酮17-34nm，5-羟色胺56-112μm，维生素e200-400μm，bfgf 2-10ng/ml，egf 2-10ng/ml，vegf 2ng/ml，tgf-β1 1-5ng/ml，胰岛素4-8μm，脂质混合物0.10％。
11、在本专利技术的某些具体实施例中，所述无血清培养基各成分浓度为：ultragrotm-advanced 5％，egf10ng/ml，b-fgf10g/ml，vegf10ng/ml、tgf-β15ng/ml，促肾上腺皮质激素(acth)200nm、睾酮34nm、5-羟色胺112μm、维生素e 400μm、胰岛素8μm，脂质混合物0.1％。
12、具体地，本专利技术所述的间充质干细胞无血清培养基还包括基础培养基，所述基础培养基包括但不限于：bme、rpmi 1640、dmem、α-mem。
13、优选地，所述基础培养基为α-mem培养基。
14、另一方面，本专利技术还提供了一种间充质干细胞无血清培养基的制备方法。
15、具体地，所述制备方法步骤为：
16、(1)量取5％的ultragrotm-advanced溶于基础培养基中，获得含5％ultragrotm-advanced的基础培养基。
17、(2)用含5％ ultragrotm-advanced的基础培养基将5-羟色胺粉末配置成56mm的浓缩液；将睾酮粉末配置成17μm的浓缩液；将促肾上腺皮质激素粉末配置成100μm的浓缩液；将维生素e粉末配置成200mm的浓缩液；将bfgf粉末配置成2μg/ml的浓缩液；将egf粉末配置成2μg/ml的浓缩液；将vegf粉末配置成2μg/ml的浓缩液；将tgf-β1粉末配置成1μg/ml的浓缩液；将胰岛素粉末配置成400μm的浓缩液。
18、(3)浓缩液按比例加入含5％ ultragrotm-advanced的基础培养基中，混合均匀，获得间充质干细胞无血清培养基。
19、优选地，制备步骤中用到的基础培养基为α-mem培养基。
20、优选地，步骤(2)中过滤步骤使用0.22μm过滤器。
21、又一方面，本专利技术提供了上述培养基在间充质干细胞培养中的应用。
22、又一方面，本专利技术提供了一种组合物，所述组合物包括上述培养基和间充质干细胞。
23、又一方面，本专利技术提供了一种间充质干细胞，所述间充质干细胞培养于上述培养基中。
24、又一方面，本专利技术提供了一种包括上述培养基和/或上述间充质干细胞的产品。
25、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
26、(1)本专利技术培养基不含血清，避免了有血清培养基体系的血清批次间的不稳定性和潜在的污染风险。
27、(2)本专利技术培养基在促进间充质干细胞生长增殖速率和细胞表型方面优于市面上商业化的间充质干细胞无血清培养基，可支持细胞长期传代培养。
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1.一种间充质干细胞无血清培养基，其特征在于，包括：UltraGROTM-Advanced、促肾上腺皮质激素、睾酮、5-羟色胺、维生素E、bFGF、EGF、VEGF、TGF-β1、胰岛素和脂质混合物。
2.根据权利要求1所述的间充质干细胞无血清培养基，其特征在于，所述培养基中各组分的用量为：UltraGROTM-Advanced 5％，促肾上腺皮质激素100-200nM，睾酮17-34nM，5-羟色胺56-112μM，维生素E 200-400μM，bFGF 2-10ng/mL，EGF 2-10ng/mL，VEGF 2-10ng/mL，TGF-β1 1-5ng/mL，胰岛素4-8μM，脂质混合物0.10％。
3.根据权利要求2所述的间充质干细胞无血清培养基，其特征在于，还包括基础培养基，所述的基础培养基选自：BME、RPMI 1640、DMEM、α-MEM。
4.一种权利要求1-3任一项所述间充质干细胞无血清培养基的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述过滤除
6.权利要求1-3任一项所述培养基在间充质干细胞培养中的应用。
7.一种组合物，其在权利要求1-3任一项所述的培养基中包括间充质干细胞。
8.一种间充质干细胞，其特征在于，所述间充质干细胞培养于权利要求1-3任一项所述的培养基中。
9.一种产品，其特征在于，所述产品包括权利要求7所述的组合物。
10.一种产品，其特征在于，所述产品包括权利要求8所述的间充质干细胞。
...【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞无血清培养基，其特征在于，包括：ultragrotm-advanced、促肾上腺皮质激素、睾酮、5-羟色胺、维生素e、bfgf、egf、vegf、tgf-β1、胰岛素和脂质混合物。
2.根据权利要求1所述的间充质干细胞无血清培养基，其特征在于，所述培养基中各组分的用量为：ultragrotm-advanced 5％，促肾上腺皮质激素100-200nm，睾酮17-34nm，5-羟色胺56-112μm，维生素e 200-400μm，bfgf 2-10ng/ml，egf 2-10ng/ml，vegf 2-10ng/ml，tgf-β1 1-5ng/ml，胰岛素4-8μm，脂质混合物0.10％。
3.根据权利要求2所述的间充质干细胞无血清培养基，其特征在于，还包括基础培养基，所述的基...
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