【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及有机酸含量测定，具体为一种高效液相色谱法测定酸笋中有机酸的优化方法。
技术介绍
1、长期以来，酸笋大多为自然发酵，酸笋发酵过程会产生许多独特的风味物质，而对酸笋影响最大的风味物质是有机酸成分。然而，目前国内外对有机酸的研究多集中在水果及酒类，对于蔬菜中有机酸的研究甚少。
2、目前有机酸的测定方法主要有滴定法、酶法、光度法和色谱法。其中，滴定法、酶法、光度法不适用于有机酸含量的测定，色谱法中，薄层色谱法能分析的有机酸有限，而且分析速度过快，其精度和灵敏度低，气相色谱法一般对样品的前处理要求较高，过程复杂，操作误差相对较大，离子色谱法，容易受到无机离子的干扰，并且仪器成本高，毛细管电色谱法的分离效率高，但实验结果误差大，高效液相色谱法具有简单、灵敏、准确的优点，因此被广泛用于测定水果和蔬菜中的有机酸，但其图像波分离散效果较差。
3、因此，设计一种高效液相色谱法测定酸笋中有机酸的优化方法是很有必要的。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供高效液相色谱法测定酸笋中有机酸的优化方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：
3、高效液相色谱法测定酸笋中有机酸的优化方法，包括以下步骤：
4、s100、混合标准品的制备，即制备六种不同有机酸质量浓度溶液；
5、s200、制作对照组试样溶液，即磷酸提取法获得的试样溶液一组与水提取法试样溶液四组；
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7、设定水相为磷酸水相与磷酸二氢钾水相，其中磷酸水相中磷酸浓度为0.1％、0.3％与0.5％，磷酸二氢钾的浓度为0.03mol/l、0.05mol/l与0.08mol/l；
8、设定有机相为甲醇，其甲醇添加量为1％、2％、3％与4％；
9、s400、设定流速对比条件，分别选定0.7ml/min、0.8ml/min、0.9ml/min、1ml/min；
10、s500、设定柱温对比条件，分别为30℃、35℃、37℃、40℃；
11、s600、设定进样量对比条件，分别为5μl、10μl、15μl、20μl；
12、s700、标曲绘制：基于s100制备的六种不同的有机酸混合溶液，对磷酸流动相与甲醇流动相依次进样，以对照品溶液峰面积为横坐标，质量浓度为纵坐标绘制标准曲线，同时计算回归方程如下：
13、x＝cf
14、式中：
15、x--------盲样中有机酸的含量(g/l)；
16、c--------由标准曲线计算出的有机酸浓度(g/l)；
17、f--------盲样稀释的倍数；
18、s800、依次进行步骤s300～s600，将s200制取的提取液进行液相制备获取，而后在检测波长为210nm的条件下进行色谱分析，并基于s700获得的回归方程计算各有机酸含量，从而观察各有机酸的色谱峰分离度；
19、s900、进行精密性测定、重复性测定与回收率测定。
20、根据上述技术方案，s100种六种不同浓度的各种有机酸混合溶液的具体制备方法如下：
21、精密称取草酸0.0370g、酒石酸0.1204g、d-苹果酸与l-苹果酸等比混合液0.1502g、乙酸0.3839g、柠檬酸0.3806g，上述重量均精确至0.0001g，置于50ml小烧杯中，用超纯水溶解并转移到50ml容量瓶，定容至刻度线，混匀，得到五种有机酸的混合标准储备溶液，而后分别吸取标准混合储备液0.67ml、1ml、1.25ml、2ml与5ml添加至5个10ml容量瓶中，用超纯水定容至刻度。
22、根据上述技术方案，s200中磷酸提取法样本与水提取法样的具体制备方法如下：
23、磷酸提取法：称取酸笋匀浆5g，加入10ml的0.5％浓度的磷酸，置于超声仪中超声40min，冷却至室温，用0.5％浓度的磷酸定容至50ml，过滤，取上清液经0.45μm滤膜过滤,作为上机待测样液；
24、水提取法：分别称取酸笋匀浆5g各4份，各加45ml超纯水浸泡，置于数控超声清洗仪中分别提取30min、40min、50min、60min，过滤取滤液于台式高速冷冻离心机10000r/min离心5min，上清液经0.45μm滤膜过滤，作为上机待测样液。
25、根据上述技术方案，s300～s600的限制条件为独立条件，实验过程中，当其一条件变化时，其余条件进行固定，不发生变化，从而获得有效的条件对照样本。
26、根据上述技术方案，s700的标曲绘制的色谱条件为：
27、水相为0.5％的磷酸水溶液，流速为1ml/min，柱温为30℃，进样量为20μl，检测波长为210nm；
28、有机相为甲醇，体积比为98：2，有机相的梯度洗脱随时间变化：0.01min～11.00min为2％，11.01min～13.01min为2％～100％，13.02min～15min为100％～2％，15.10min停止，流速为1ml/min，柱温为30℃，进样量为20μl，检测波长为210nm。
29、根据上述技术方案，s900中的进行精密性测定为对于同一个混合标准品，基于s700的色谱条件，连续进样5次，根据所得峰面积及保留时间分别计算精密度。
30、根据上述技术方案，s900中的重复性测定为对s200制备的试样溶液，进行依据s300～s600分别重复测定5次，计算有机酸含量。
31、根据上述技术方案，s900中的回收率测定如下：
32、精密吸取已知含量的样品滤液1ml置于10ml容量瓶中，分别加入含10mg的草酸与柠檬酸，20mg的酒石酸与乙酸，20mg的d-苹果酸与l-苹果酸等比混合液，加超纯水定容至刻度线，混匀，溶液过0.45μm滤膜后置于进样瓶中，在s700的色谱条件下，重复进样5次，根据如下公式计算回收率：
33、加标回收率＝([加标后的质量－样品中质量)÷加标量]×100％。
34、与现有技术相比，本专利技术所达到的有益效果是：
35、通过对高效液相色谱法优化，使得对酸笋中的有机酸测定的能够根据准确，且对测定过程中的波峰分类参数更优，能够对后续数据的处理与分析提供更有效支撑，同时对酸笋的发酵过程中各种有机酸类的变化与含量控制，从而获取更优的口感，对后续的加工与开发提供支撑。
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1.高效液相色谱法测定酸笋中有机酸的优化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定酸笋中有机酸的优化方法，其特征在于，S100种六种不同浓度的各种有机酸混合溶液的具体制备方法如下：
3.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定酸笋中有机酸的优化方法，其特征在于，S200中磷酸提取法样本与水提取法样本的具体制备方法如下：
4.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定酸笋中有机酸的优化方法，其特征在于，S300～S600的限制条件为独立条件，实验过程中，当其一条件变化时，其余条件进行固定，不发生变化，从而获得有效的条件对照样本。
5.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定酸笋中有机酸的优化方法，其特征在于，S700的标曲绘制的色谱条件为：
6.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定酸笋中有机酸的优化方法，其特征在于，S900中的进行精密性测定为对于同一个混合标准品，基于S700的色谱条件，连续进样5次，根据所得峰面积及保留时间分别计算精密度。
7.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测
8.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定酸笋中有机酸的优化方法，其特征在于，S900中的回收率测定如下：
...【技术特征摘要】
1.高效液相色谱法测定酸笋中有机酸的优化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定酸笋中有机酸的优化方法，其特征在于，s100种六种不同浓度的各种有机酸混合溶液的具体制备方法如下：
3.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定酸笋中有机酸的优化方法，其特征在于，s200中磷酸提取法样本与水提取法样本的具体制备方法如下：
4.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定酸笋中有机酸的优化方法，其特征在于，s300～s600的限制条件为独立条件，实验过程中，当其一条件变化时，其余条件进行固定，不发生变化，从而获得有效的条件对照样本。
5.根据权利要求1所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：崔娜，熊建文，巩僖，董一乐，徐建国，韦潇丽，卿明义，徐盛，陆曼曼，郑立浪，梁晓丽，
申请(专利权)人：柳州工学院，
类型：发明
国别省市：
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