一种聚酯型儿茶素A的体外酶法高效合成方法技术

技术编号：42651211 阅读：23 留言：0更新日期：2024-09-06 01:44

一种聚酯型儿茶素A的体外酶法高效合成方法，属于茶叶深加工领域。包括以下步骤：1)配制表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)溶液；2)马铃薯块茎匀浆后过滤离心，经硫酸铵盐析后透析冻干，得马铃薯多酚氧化酶酶粉；3)EGCG溶液中加入马铃薯多酚氧化酶酶粉，控温搅拌反应，促进EGCG向脱氢聚酯型儿茶素A转化；4)反应结束后添加维生素C并加热反应液，促进脱氢聚酯型儿茶素A向聚酯型儿茶素A转化；5)反应液经膜过滤，真空旋转蒸发浓缩，干燥，得到聚酯型儿茶素A产品。上述一种聚酯型儿茶素A的体外酶法高效合成方法，专一性强，条件温和，酶廉价易得，聚酯型儿茶素A生成率显著高于传统多酚氧化酶合成方法，可达50％‑60％，接近化学氧化方法，且有效避免了化学制备方法操作过程中带来的一系列环保问题，为聚酯型儿茶素A的体外高效酶法合成提供了新思路。

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【技术实现步骤摘要】

一种聚酯型儿茶素a的体外酶法高效合成方法，属于茶叶深加工领域。

技术介绍

1、聚酯型儿茶素a(tsa)是茶叶加工过程中表没食子儿茶素没食子酸酯(egcg)经酶促氧化作用形成的一种儿茶素二聚体，不仅影响茶的感官品质，而且有一定的消炎、杀菌、减肥、抗病毒、抗氧化、降血糖、降胆固醇等生物活性。tsa相较于egcg稳定性更好，因此在食品、医药及日化等领域拥有更加广阔的应用前景。然而，tsa在成品茶叶中的含量极低，直接提取法得率低，无法直接从茶叶中规模化获取，难以满足研究、生产的需要。目前，tsa的体外合成方法主要有两种：一种是化学氧化合成法，即egcg在化学氧化剂的催化下合成；另一种是酶促氧化合成法，即egcg在多酚氧化酶等酶的酶促催化下合成。化学氧化合成法转化率高，但是专一性不强，且操作过程中存在一系列环保问题；而酶促合成具有高效性专一性，反应条件温和，是较为理想的聚酯型儿茶素a合成方法，但酶原价格昂贵，目标产物生成率较低。因此，需要寻找合适的酶或合成方法来高效、大规模制备tsa。

技术实现思路

1、针对现有技术中存在的上述问题，本专利技术的目的在于设计提供一种简单、高产率的tsa的体外酶法高效合成方法的技术方案，通过反应结束后添加维生素c并加热从而大幅度提高转化率，专一性强，条件温和，酶廉价易得，tsa生成率高，可达50％-60％，接近化学氧化方法，且有效避免了化学氧化方法操作过程中带来的一系列环保问题，为tsa的体外酶法高效合成提供了新思路。

2、1)配制表没食子儿茶素没食子酸酯(egcg)溶液；

3、2)马铃薯匀浆后过滤离心，经硫酸铵盐析后透析冻干，得马铃薯多酚氧化酶酶粉：

4、3)egcg溶液中加入马铃薯多酚氧化酶酶粉，控温搅拌反应，促进egcg向脱氢聚酯型儿茶素a转化；

5、4)反应结束后加入维生素c并加热，进行酶的灭活及促进脱氢聚酯型儿茶素a向聚酯型儿茶素a转化；

6、5)反应液经膜过滤后真空旋转蒸发浓缩，干燥，得到tsa。

7、所述的一种tsa的体外酶法高效合成方法，其特征在于步骤1)中：配制egcg溶液的试剂为磷酸盐缓冲液，ph值为5-6，优选5.5-5.6。

8、所述的一种tsa的体外酶法高效合成方法，其特征在于步骤2)中：硫酸铵第一次添加量为20％-30％饱和度，静置4h离心后将上清饱和度调至60％-80％，优选70-80％，再次静置4h后离心取沉淀。

9、所述的一种tsa的体外酶法高效合成方法，其特征在于步骤3)中：控温反应的温度为20-30。c，优选25-27。c；反应时间为150-240min，优选180-200min。

10、所述的一种tsa的体外酶法高效合成方法，其特征在于步骤4)中：加热温度为75-90。c，优选80-85℃；反应时间为10-20min，优选15-18min；所加维生素c为维生素c饱和溶液，加入量为egcg溶液体积的10％。

11、本专利技术具有以下优点：

12、上述一种tsa的体外酶法高效合成方法，专一性强，条件温和，酶廉价易得，tsa生成率显著高于传统多酚氧化酶合成方法，可达50％-60％，接近化学氧化方法，且有效避免了化学氧化方法操作过程中带来的一系列环保问题，为tsa的体外高效酶法合成提供了新思路。

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【技术保护点】

1.一种聚酯型儿茶素A的体外酶法高效合成方法，其特征在于包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的一种聚酯型儿茶素A的体外酶法高效合成方法，其特征在于步骤1)中：EGCG溶液的试剂为磷酸盐缓冲液，pH值为5-6，优选5.6。

3.如权利要求1所述的一种聚酯型儿茶素A的体外酶法高效合成方法，其特征在于步骤2)中：硫酸铵第一次添加量为20％-30％饱和度，静置4h离心后将上清饱和度调至50％-80％，优选60％-80％，再次静置4h后离心取沉淀。

4.如权利要求1所述的一种聚酯型儿茶素A的体外酶法高效合成方法，其特征在于步骤3)中：控温反应的温度为20-30℃，优选23-26℃；反应时间为150-240min，优选180-200min。

5.权利要求1所述的一种聚酯型儿茶素A的体外酶法高效合成方法，其特征在于步骤4)中：所加维生素C为维生素C饱和溶液，加入量为EGCG溶液体积的10％；加热温度为75-90℃，优选80-85℃；反应时间为10-20min，优选15-18min。

【技术特征摘要】

1.一种聚酯型儿茶素a的体外酶法高效合成方法，其特征在于包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的一种聚酯型儿茶素a的体外酶法高效合成方法，其特征在于步骤1)中：egcg溶液的试剂为磷酸盐缓冲液，ph值为5-6，优选5.6。

3.如权利要求1所述的一种聚酯型儿茶素a的体外酶法高效合成方法，其特征在于步骤2)中：硫酸铵第一次添加量为20％-30％饱和度，静置4h离心后将上清饱和度调至50％-80％，优选60％-80％，再次静置4h后离心取沉淀...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾晓雄，孔祥慧，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：

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