【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物合成，具体而言，涉及一种含rna碱基的固相载体及其制备方法。
技术介绍
1、在寡核苷酸的发展历程中，存在两种制备方法，一为液相合成法，另一种方法为固相合成法。就目前市场行情看，固相合成方法仍为主流。寡核苷酸的固相合成是基于常规的固相载体，再利用亚磷酰胺单体进行偶联，多次循环后得到目标核酸序列。常用的固相合成载体有两种，可控玻璃微球(cpg)和聚苯乙烯树脂(ps)。而这两种固相合成载体各有优缺点，cpg载体一般载量(loading)较低，一般小于100μmol/g，缺点是低载量会导致寡核苷酸单批次合成规模受限，试剂使用量增多，设备利用率低，生产成本高；优点是载体在不同的溶剂中不会溶胀，适合用于多通道的合成仪的合成，同时不同粒径的cpg可用于合成碱基数更长的寡核苷酸序列。ps的载量(loading)较高，常规的可以达到100-350μmol/g，其缺点是在合成或洗涤过程中树脂体积会发生较大变化，造成反应器中较大的死体积。同时制备的ps的载体孔径分布不均匀，也会影响水分的去除和下一步寡核苷酸的合成效率；优点是高载量，可以单批次生产更多量的寡核苷酸。
2、由于近年来寡核苷酸药物的研究取得巨大进展，越来越多的寡核苷酸药物开始进入临床阶段。不同厂家也针对cpg和ps固相载体上的官能团进行了修饰，优化了树脂孔径，提高了载量以及不同溶剂中的溶胀性，更好的用于寡核苷酸的固相合成中。
3、目前寡核苷酸在载体上的负载，通常是将载体与寡核苷酸通过linker连接(见图1)，常规氨解条件氨解，很容易将核酸序列从树
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种含rna碱基的固相载体及其制备方法。
2、本专利技术解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
3、本专利技术提供一种含rna碱基的固相载体的制备方法，其包括：在rna核苷的3’位上引入丁二酸酐盐，然后与载体本体进行缩合反应以将rna核苷引入到载体本体上，得到含rna碱基的固相载体。
4、本专利技术还提供一种根据上述制备方法制备的含rna碱基的固相载体。
5、本专利技术具有以下有益效果：
6、本专利技术提供的一种含rna碱基的固相载体及其制备方法。本专利技术提供的含rna碱基的固相载体的制备方法，直接将rna核苷引入到载体本体上，合成好的寡核苷酸序列与固相载体之间没有linker连接，常规氨解条件就可以氨解，不存在氨解条件下切割不完全的情况，从而高效率、高质量地完成寡核苷酸的生产。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种含RNA碱基的固相载体的制备方法，其特征在于，其包括：在RNA核苷的3’位上引入丁二酸酐盐，然后与载体本体进行缩合反应以将RNA核苷引入到载体本体上，得到含RNA碱基的固相载体。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：在RNA核苷的3’位上引入丁二酸酐盐得到改性RNA核苷，将所述改性RNA核苷溶于有机溶剂中得到改性RNA核苷溶液，将所述载体本体与所述RNA核苷溶液混合，加入缩合剂和催化剂后进行缩合反应，得到含RNA碱基的固相载体。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述改性RNA核苷的结构如下式所示：
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述载体本体包括可控玻璃微球(CPG)或者聚苯乙烯树脂(PS)；
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，加入所述缩合剂以及所述催化剂后，置于摇床内进行缩合反应；
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述催化剂包括DIPEA，DMAP，DBU，乙二胺，二甲胺，二乙胺，三甲胺，三乙胺，丙胺，异丙胺，1,3-丙二胺，1,2-
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述缩合剂包括HATU，HBTU，HCTU，HAPyU，HBPyU，TBTU，TSTU，TNTU，BOP，PyBOP，PyAOP中的至少一种。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，还包括：缩合反应结束后，将反应液进行过滤，收集滤饼，用有机溶剂洗涤并干燥，再将干燥后的滤饼与盖帽剂反应，盖帽后的反应液重新过滤得滤饼，并用有机溶剂清洗干燥，最终得到含RNA碱基的固相载体；
9.根据权利要求2-8中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂包括甲醇，乙醇，异丙醇，乙腈，N,N-二甲基甲酰胺，二甲基亚砜，二氯甲烷，甲苯，丙酮，乙酸乙酯中的至少一种；
10.一种根据权利要求1-9中任一项所述制备方法制备的含RNA碱基的固相载体。
...【技术特征摘要】
1.一种含rna碱基的固相载体的制备方法，其特征在于，其包括：在rna核苷的3’位上引入丁二酸酐盐，然后与载体本体进行缩合反应以将rna核苷引入到载体本体上，得到含rna碱基的固相载体。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：在rna核苷的3’位上引入丁二酸酐盐得到改性rna核苷，将所述改性rna核苷溶于有机溶剂中得到改性rna核苷溶液，将所述载体本体与所述rna核苷溶液混合，加入缩合剂和催化剂后进行缩合反应，得到含rna碱基的固相载体。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述改性rna核苷的结构如下式所示：
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述载体本体包括可控玻璃微球(cpg)或者聚苯乙烯树脂(ps)；
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，加入所述缩合剂以及所述催化剂后，置于摇床内进行缩合反应；
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述催化剂包括dipea，dmap，dbu...
【专利技术属性】
技术研发人员：王云端，赵海，
申请(专利权)人：北京欧利格生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。