【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及刀鲚地理溯源，具体涉及一种用于刀鲚地理溯源的微卫星引物对、试剂盒、鉴别方法。
技术介绍
1、公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
2、刀鲚(coilia nasus)，又称刀鱼或毛花鱼，属于鲱形目(clupeiformes)鳀科(engraulidae)，在中国，主要分布于东海、黄海、渤海及通海的江河如长江和钱塘江。特别是在长江流域，刀鲚是一种重要的溯河洄游型经济鱼类，以其肉质鲜嫩和味道美好而深受喜爱，与鲥鱼(tenualosa reevesii)和暗纹东方鲀(takifugu obscuns)并称为“长江三鲜”。20世纪70年代之前，长江口的刀鲚常有集中捕捞期。然而，自90年代以来，受到多种因素影响，刀鲚的产卵场受到破坏，资源量急剧减少，甚至无法形成捕捞汛期，并呈现出个体小型化和性早熟的现象。2001年，刀鲚被列入首批《国家重点保护经济水生动植物资源名录》。
3、溯源技术是水产品安全管理的重要手段，通过该技术可以有效地监管和保障产品质量。当前，市场上的重要水产品种类、养殖环境和产地信息标注存在混乱，这给消费者带来了很大的困扰。特别是在长江禁捕期间，淡水渔获产品的市场监管面临重大挑战。目前，我国重要淡水渔获的溯源技术体系发展较慢，尤其是缺乏有效的野生群体和养殖群体溯源方法。因此，建立系统的刀鲚等重要水产品的溯源方法对于维护市场秩序和加强长江禁捕监管至关重要。
4、
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在的技术问题，本专利技术公开了一种用于刀鲚地理溯源的微卫星引物对、试剂盒、鉴别方法，针对长江流域刀鲚，本专利技术将提供检测微卫星遗传标记的多个引物对，试剂盒，用于检测刀鲚个体微卫星信息，在此基础上提供野生/养殖刀鲚地理溯源鉴别方法，为长江流域野生/养殖刀鲚的区分、及非法捕捞刀鲚地理溯源提供有效工具，为长江禁渔执法提供有力证据。
2、具体地，本专利技术的技术方案如下所述：
3、本专利技术的第一方面，提供一种用于刀鲚地理溯源的微卫星引物对，包括：
4、dj41：f:5'-gtgatgttgttgaacctgag-3'，其核苷酸序列如seq id no.1所示；
5、r:5'-ccgtcctttactctttgtct'，其核苷酸序列如seq id no.2所示；
6、dj578：f:5'-tgtcacaccgagtaatgtc-3'，其核苷酸序列如seq id no.3所示；
7、r:5'-agaggatgagagatagaagga'，其核苷酸序列如seq id no.4所示；
8、cnas01：f:5'-tgctatctgtgatgatgctacg-3'，其核苷酸序列如seq id no.5所示；
9、r:5'-gaatacctgcccttgtttcttg'，其核苷酸序列如seq id no.6所示；
10、cnas04：f:5'-gtatgtttgtgagggtatggga-3'，其核苷酸序列如seq id no.7所示；
11、r:5'-gtgagcaaggaacggatagtaa'，其核苷酸序列如seq id no.8所示；
12、cnas07：f:5'-cattctttcctcccatcccata-3'，其核苷酸序列如seq id no.9所示；
13、r:5'-gactccttccaagacccactga'，其核苷酸序列如seq id no.10所示；
14、cnas15：f:5'-tggtaatggcactaatggtatg-3'，其核苷酸序列如seq id no.11所示；
15、r:5'-taaatcaaccaaccaagaaaca'，其核苷酸序列如seq id no.12所示；
16、cnas11：f:5'-aggtggtaaaagacccaaagaa-3'，其核苷酸序列如seq id no.13所示；
17、r:5'-tgttttccctcaatccatcata'，其核苷酸序列如seq id no.14所示；
18、ce03：f:5'-cttcatacagtattaggaccaga-3'，其核苷酸序列如seq id no.15所示；
19、r:5'-acttcagtctgctttggaatgtg'，其核苷酸序列如seq id no.16所示；
20、ce04：f:5'-caatgaggtacgttattcacagaa-3'，其核苷酸序列如seq id no.17所示；
21、r:5'-tgcagaccagatctactgaggctcc'，其核苷酸序列如seq id no.18所示；
22、在一种具体的实施方式中，所述微卫星引物对的正向引物5’端进行荧光标记，荧光标记所用的荧光基团选自fam或hex。通过荧光标记，毛细管电泳检测中根据荧光信号对每个个体微卫星进行分型。
23、本专利技术的第二方面，提供一种用于刀鲚地理溯源的试剂盒，包括：第一方面所述的微卫星引物对。
24、在一种具体的实施方式中，所述用于刀鲚地理溯源的试剂盒，还包括：2×taqmaster mix和ddh2o。
25、本专利技术的第三方面，提供一种刀鲚地理溯源鉴别方法，包括以下步骤：
26、(1)提取待测刀鲚样本的基因组dna；
27、(2)使用第一方面所述的微卫星引物对对所述基因组dna进行pcr扩增；
28、(3)将扩增的pcr产物在基因分析仪上利用毛细管电泳法进行检测，得到检测结果；
29、(4)根据所述检测结果，采用软件对不同群体刀鲚肌肉微卫星数据集进行线性判别分析，构建不同水域刀鲚的fisher函数判别模型；
30、(5)根据所述不同水域刀鲚的fisher函数判别模型判断刀鲚的来源水域；
31、在一种具体的实施方式中，步骤(2)中，所述pcr扩增的总反应体系为20μl，其中2×taq master mix 10μl，基因组dna2μl，上下游引物各1μl，ddh2o 7μl。
32、优选地本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于刀鲚地理溯源的微卫星引物对，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的用于刀鲚地理溯源的微卫星引物对，其特征在于，所述微卫星引物对的正向引物5’端进行荧光标记，荧光标记所用的荧光基团选自FAM或HEX。
3.一种用于刀鲚地理溯源的试剂盒，其特征在于，包括：权利要求1或2所述的微卫星引物对。
4.如权利要求3所述的用于刀鲚地理溯源的试剂盒，其特征在于，还包括：2×TaqMaster Mix和ddH2O。
5.一种刀鲚地理溯源鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.如权利要求5所述的刀鲚地理溯源鉴别方法，其特征在于，步骤(2)中，所述PCR扩增的总反应体系为20μL，其中2×Taq Master Mix 10μL，基因组DNA 2μL，上下游引物各1μL，ddH2O 7μL。
7.如权利要求5所述的刀鲚地理溯源鉴别方法，其特征在于，步骤(3)中，每个毛细管电泳法样品中含有1μL PCR产物、0.4μL Genescan-500分子质量标准品和20μL去离子甲酰胺；在毛细管电泳过程中，PCR产物与Ge
8.如权利要求5所述的刀鲚地理溯源鉴别方法，其特征在于，步骤(4)中，不同水域刀鲚的Fisher函数判别模型包括：
9.如权利要求5所述的刀鲚地理溯源鉴别方法，其特征在于，步骤(5)中根据所述不同水域刀鲚的Fisher函数判别模型判断刀鲚的来源水域的方法为：比较FTZ、FSH、FHK、FYZ的大小，最大的数值对应的地域即为待测刀鲚的来源水域。
10.权利要求1或2所述的用于刀鲚地理溯源的微卫星引物对和/或权利要求3或4所述的用于刀鲚地理溯源的试剂盒和/或权利要求5至9任一项所述的刀鲚地理溯源鉴别方法在刀鲚地理溯源鉴别的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于刀鲚地理溯源的微卫星引物对，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的用于刀鲚地理溯源的微卫星引物对，其特征在于，所述微卫星引物对的正向引物5’端进行荧光标记，荧光标记所用的荧光基团选自fam或hex。
3.一种用于刀鲚地理溯源的试剂盒，其特征在于，包括：权利要求1或2所述的微卫星引物对。
4.如权利要求3所述的用于刀鲚地理溯源的试剂盒，其特征在于，还包括：2×taqmaster mix和ddh2o。
5.一种刀鲚地理溯源鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.如权利要求5所述的刀鲚地理溯源鉴别方法，其特征在于，步骤(2)中，所述pcr扩增的总反应体系为20μl，其中2×taq master mix 10μl，基因组dna 2μl，上下游引物各1μl，ddh2o 7μl。
7.如权利要求5所述的刀鲚地理溯源鉴别方法，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐永凯，冯文荣，张瑜，李建林，许元峰，魏佳，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心，
类型：发明
国别省市：
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