System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 热稳定乙酰转移酶突变体及其编码基因以及它们的应用制造技术_技高网

热稳定乙酰转移酶突变体及其编码基因以及它们的应用制造技术

技术编号:42622729 阅读:26 留言:0更新日期:2024-09-06 01:26
本发明专利技术属于酶工程领域,公开了一种热稳定乙酰转移酶突变体及其编码基因以及它们的应用,其中,所述乙酰转移酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID No:4所示。另外,本发明专利技术还提供了含有该编码基因的重组载体和转基因细胞,含有所述乙酰转移酶突变体作为活性成分的组合物,以及如上所述的乙酰转移酶突变体、编码基因、重组载体、转基因细胞和组合物在生产N<supgt;α</supgt;‑乙酰‑α‑赖氨酸的应用。本发明专利技术提供的乙酰转移酶突变体具有较高的热稳定性和活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种乙酰转移酶突变体、所述乙酰转移酶突变体的编码基因,含有该编码基因的重组载体和转基因细胞,含有所述乙酰转移酶突变体作为活性成分的组合物,以及如上所述的乙酰转移酶突变体、编码基因、重组载体、转基因细胞和组合物在生产nα-乙酰-α-赖氨酸中的应用。


技术介绍

1、相容性溶质(compatible solutes)是一些极性的小分子有机物质,它们可以在细胞内大量积累并且保护细胞和生物大分子的同时,不妨碍细胞内的正常代谢活动。它们主要被发现在嗜盐菌和嗜热菌中,这类微生物通过积累不同种类和浓度的相容性溶质来抵御外界环境的渗透压胁迫[galinski, e. a. et al., eur. j. biochem. , 1985, vol.149, pp. 135-139],以及在干燥、高温、冰冻等逆境下稳定和保护细胞和生物大分子的作用,因此它们在酶应用技术、生物医学、制药和化妆品等领域有着广泛的应用前景[lentzen, g. and t. schwarz, 2006, vol. 72, pp. 623-634]。目前发现的相容性溶质主要有氨基酸及其衍生物类、糖类及糖苷类、磷酸二酯类和多元醇类[truper, h. g. etal., experientia, 1986, vol. 42, pp. 1182-1187]。nα-乙酰-α-赖氨酸是乙酰氨基酸类相容性溶质,是在中度嗜盐菌 salinicoccus halodurans中发现的,胞内nα-乙酰-α-赖氨酸的积累会对高盐和高温作出正向的响应[jiang, k. et al., scientific reports,2015, 5:18518]。该菌株的nα-乙酰-α-赖氨酸的合成途径是从天冬氨酸开始,经过赖氨酸,最后通过赖氨酸nα-乙酰基转移酶(shkat)催化nα-乙酰-α-赖氨酸的生成[ma, x. et al.,microbial biotechnology, 2022, 15:1652-1665]。

2、目前,相容性溶质的生产研究多采用细菌挤奶工艺,该工艺发酵生产相容性溶质需要使用高盐度的培养基,而高浓度的盐会对设备造成腐蚀,增加发酵操作的难度,影响相容性溶质产量。近年来,大肠杆菌因其遗传背景清晰、遗传操作系统成熟、生长速度快、易于培养、发酵周期短等诸多优势而被越来越多的研究者所利用[yang, d. et al., trendsbiotechnol, 2020, 38:745-765]。为了构建nα-乙酰-α-赖氨酸的高产菌株,shkat作为合成途径中最后一步的酶,发挥着重要的作用,而其酶活性和热稳定性是影响其应用的关键因素之一。从嗜盐菌( salinicoccus halodurans,cgmcc 1.6501)克隆得到的乙酰转移酶shkat由于其热稳定性不理想,50℃保温30min就基本丧失了活性,因此,提高其热稳定性具有重要意义。


技术实现思路

1、本专利技术的目的是为了克服现有乙酰转移酶不能够耐高温的缺陷,提供了一种热稳定乙酰转移酶突变体及其编码基因以及它们的应用

2、为了实现上述目的,一方面,本专利技术提供了一种乙酰转移酶突变体,其中,所述乙酰转移酶突变体的氨基酸序列如seq id no:4所示。

3、第二方面,本专利技术提供了一种编码基因,其中,所述编码基因能够编码如上所述的乙酰转移酶突变体。

4、第三方面,本专利技术提供了一种重组载体,其中,所述重组载体含有如上所述的编码基因。

5、第四方面,本专利技术提供了一种转基因细胞,其中,所述转基因细胞含有如上所述的编码基因。

6、第五方面,本专利技术提供了一种组合物,其中,所述组合物含有如上所述的乙酰转移酶突变体作为活性成分。

7、第六方面,本专利技术提供了如上所述的乙酰转移酶突变体、如上所述的编码基因、如上所述的重组载体、如上所述的转基因细胞、如上所述的组合物在生产nα-乙酰-α-赖氨酸中的应用。

8、本专利技术提供的乙酰转移酶突变体的热稳定性高,且活性也较高,具有较大的应用潜力。

9、本专利技术的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种乙酰转移酶突变体,其特征在于,所述乙酰转移酶突变体的氨基酸序列如SEQID No:4所示。

2.一种编码基因,其特征在于,所述编码基因能够编码权利要求1所述的乙酰转移酶突变体。

3.根据权利要求2所述的编码基因,其中,所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No:2所示。

4.一种重组载体,其特征在于,所述重组载体含有权利要求2或3所述的编码基因。

5.一种转基因细胞,其特征在于,所述转基因细胞含有权利要求2或3所述的编码基因。

6.根据权利要求5所述的转基因细胞,其中,所述转基因细胞为原核细胞。

7.根据权利要求5所述的转基因细胞,其中,所述转基因细胞为大肠杆菌。

8.根据权利要求5所述的转基因细胞,其中,所述转基因细胞为大肠杆菌DH5α。

9.一种组合物,其特征在于,所述组合物含有权利要求1所述的乙酰转移酶突变体作为活性成分。

10.权利要求1所述的乙酰转移酶突变体、权利要求2或3所述的编码基因、权利要求4所述的重组载体、权利要求5-8中任意一项所述的转基因细胞、权利要求9所述的组合物在生产Nα-乙酰-α-赖氨酸中的应用。

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【技术特征摘要】

1.一种乙酰转移酶突变体,其特征在于,所述乙酰转移酶突变体的氨基酸序列如seqid no:4所示。

2.一种编码基因,其特征在于,所述编码基因能够编码权利要求1所述的乙酰转移酶突变体。

3.根据权利要求2所述的编码基因,其中,所述编码基因的核苷酸序列如seq id no:2所示。

4.一种重组载体,其特征在于,所述重组载体含有权利要求2或3所述的编码基因。

5.一种转基因细胞,其特征在于,所述转基因细胞含有权利要求2或3所述的编码基因。

6.根据权利要求5所述的转...

【专利技术属性】
技术研发人员:薛燕芬马延和张梦捷王建新周成
申请(专利权)人:中国科学院微生物研究所
类型:发明
国别省市:

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