【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞培养，具体为黄唇鱼鳍条细胞系的建立、鉴定方法及其在鱼类病毒学和免疫学中的应用。
技术介绍
1、黄唇鱼(bahaba flavolabiata)隶属硬骨鱼纲鲈形同石首鱼科，为近海暖温性底层肉食性鱼类，栖息于近海水深50-60m的海区，喜欢在淡水和海水的交汇河口海域生活。目前的数据表明，至少有4种病毒可以感染养殖和野生的黄唇鱼，这些病原体的感染通常与高死亡率事件有关。
2、世界动物卫生组织(oie)推荐的病毒鉴定金标准是细胞培养分离和事后鉴定。更重要的是，易感鱼细胞系对于疫苗开发、重组蛋白的生产是必需的，并且这些细胞系用作研究病毒病理学和免疫学的合适模型，目前大约有783种鱼类细胞系可供研究人员使用，尽管组织来源是多种多样的，但大多数鱼类细胞系是从鱼鳍和胚胎中获得的。
3、然而，只有2个大口黑鲈细胞系lbt-2来源于尾干和来源于卵巢的性腺细胞系。并且现有的这些细胞系不是商业上可获得的。无法大量有效的应用于疫苗开发、重组蛋白生产等领域，因此本专利技术提供一种黄唇鱼鳍条细胞系的建立、鉴定方法及其在鱼类病...
【技术保护点】
1.黄唇鱼鳍条细胞系的应用，其特征在于：黄唇鱼鳍条细胞系应用于鱼类病毒学、遗传学和免疫学领域中，黄唇鱼鳍条细胞系还可以应用于水生动物保护和水产养殖技术领域。
2.一种黄唇鱼鳍条细胞系的建立方法，其特征在于：该建立方法的流程如下：无菌剪切黄唇鱼的鳍条组织进行洗涤；洗涤后，用剪刀将组织切碎，用胰蛋白酶EDTA溶液的混合物分散成单个细胞，悬浮液进行网筛过滤，将细胞进行多次洗涤，然后转移到组织培养瓶中进行孵育；定期更换部分培养基，直到迁移的细胞形成汇合的单层，培养单层细胞，继代培养直至停止使用抗生素。
3.根据权利要求2所述的黄唇鱼鳍条细胞系的建立方法...
【技术特征摘要】
1.黄唇鱼鳍条细胞系的应用，其特征在于：黄唇鱼鳍条细胞系应用于鱼类病毒学、遗传学和免疫学领域中，黄唇鱼鳍条细胞系还可以应用于水生动物保护和水产养殖技术领域。
2.一种黄唇鱼鳍条细胞系的建立方法，其特征在于：该建立方法的流程如下：无菌剪切黄唇鱼的鳍条组织进行洗涤；洗涤后，用剪刀将组织切碎，用胰蛋白酶edta溶液的混合物分散成单个细胞，悬浮液进行网筛过滤，将细胞进行多次洗涤，然后转移到组织培养瓶中进行孵育；定期更换部分培养基，直到迁移的细胞形成汇合的单层，培养单层细胞，继代培养直至停止使用抗生素。
3.根据权利要求2所述的黄唇鱼鳍条细胞系的建立方法，其特征在于，还包括超低温保存和复苏过程：黄唇鱼鳍条细胞在多次传代后冷冻保存；细胞被传代培养并生长至汇合，进行离心处理；将沉淀的细胞悬浮在新鲜制备的冷冻液中观察培养基，然后将细胞悬液转移至在冷冻瓶中，最后转移到液氮中。
4.根据权利要求3所述的黄唇鱼鳍条细胞系的建立方法，其特征在于，所述复苏过程包括：将冷冻小瓶快速解冻，并将细胞逐滴混合在l-15完全培养基，再将试管进行离心处理，悬浮在l-15完全培养基中，并接种到细胞瓶中接种培养。
5.根据权利要求2所述的黄唇鱼鳍条细胞系的建立方法，其特征在于：l-15中添加胎牛血清、青霉素和链霉素；所述鳍条组织用青霉素和链霉素的磷酸盐缓冲盐水洗涤。
6.一种黄唇鱼鳍条细胞系的鉴定方法，其特征在于，所述鉴定方法包括细胞生长速率分析、染色体分析、gfp报告基因转染、支原体污染的检测、细胞系的来源的确认、病毒敏感性分析、病毒滴度的测定、抗病毒免疫。
7.根据权利要求6所...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗素君，陆丙乾，胡玉婷，陆昌胜，黄建强，刘文瑜，酆伟，戴国贤，周永东，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：
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