【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种特异性识别非洲猪瘟病毒的纳米抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
1、
2、非洲猪瘟病毒是目前已知的唯一的虫媒传播的dna病毒，软蜱是非洲猪瘟病毒的贮藏宿主和传播媒介。非洲猪瘟病毒可经过口和上呼吸道系统感染猪，在鼻咽部或是扁桃体发生感染，病毒迅速蔓延到下颌淋巴结，通过淋巴和血液遍布全身。随着非洲猪瘟的发生和流行，病毒变异持续发生，尤其基因缺失毒株以及基因i型毒株的出现，引起的亚急性和慢性型病例逐步增加，早期单一的病原学检测方法已无法完全满足目前该病防控的需求。非洲猪瘟血清抗体的检测对于亚急性和慢性型病例的诊断及该病的净化尤为重要。
3、纳米抗体是一种相对较新的诊断探针，是由骆驼科的免疫系统进化而产生的重链抗体可变区片段，这些重链抗体包含有一个单体可变抗体结构域，大小约12-15kda。作为与抗原结合并发挥诊断和治疗作用的最小的抗体片段，纳米抗体具有如下优势：①生产成本低：纳米抗体分子量较小，可在不同的表达系统实现大量生产和制备；②易于定制以满足应用要求(可提高特异性和亲和力以提高检测性能)：编码纳米抗体的基因可以很容易地重新设计，以选择改变的结合特性或用于免疫测定配置的表位标记；③体积较小：仅为普通抗体的十分之一，在动物组织体内的穿透力更强；④结构稳定：纳米抗体在极端温度和ph条件下仍能发挥作用，而传统的抗体在这样的状态下则会失活；⑤纳米抗体能够识别独特的抗原表位，比普通抗体具有更广泛的抗原结合能力。因此，纳米抗体是目前可以得到的功能完整、稳定且可与抗原结合的最小单位，由于它
技术实现思路
1、针对上述技术问题，本专利技术提供特异性识别非洲猪瘟病毒的纳米抗体kr-2及其制备方法和应用，所述纳米抗体与非洲猪瘟病毒k205r蛋白具有较高的亲和力，且能够特异性识别非洲猪瘟病毒，可用于非洲猪瘟的诊断、预防或治疗。具体包括以下内容：
2、第一方面，本专利技术提供了一种特异性识别非洲猪瘟病毒的纳米抗体kr-2，所述纳米抗体kr-2的氨基酸序列如seq id no.1所示。
3、第二方面，本专利技术提供了一种编码上述第一方面所述纳米抗体kr-2的核酸。
4、优选地，所述核酸序列如sqe id no.2所示。
5、第三方面，本专利技术提供了一种表达载体，所述表达载体含有上述第二方面所述的核酸序列。
6、第四方面，本专利技术提供了一种免疫偶联物，所述免疫偶联物包括：
7、(i)上述第一方面所述的纳米抗体kr-2；
8、(ii)和选自下组的偶联部分：可检测标记物、药物、金纳米颗粒/纳米棒、纳米磁粒、病毒外壳蛋白或vlp、或其组合。
9、第五方面，本专利技术提供了上述第一方面所述的纳米抗体kr-2或上述第四方面所述的免疫偶联物在制备非洲猪瘟病毒检测试剂或试剂盒中的应用。
10、第六方面，本专利技术提供了一种非洲猪瘟病毒检测试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括上述第一方面所述的纳米抗体kr-2。
11、第七方面，本专利技术提供了一种组合物，所述组合物包括上述第一方面所述的纳米抗体kr-2。
12、第八方面，本专利技术提供了上述第一方面所述的纳米抗体kr-2的制备方法，所述方法包括：
13、(1)合成编码上述第一方面所述纳米抗体kr-2的核苷酸序列；
14、(2)将步骤(1)所述核苷酸序列与载体/质粒连接，构建纳米抗体kr-2的表达载体；
15、(3)将纳米抗体kr-2的表达载体转化细菌，构建重组细胞，进行诱导表达并纯化获得纳米抗体kr-2。
16、优选地，所述纳米抗体kr-2的核苷酸序列如sqe id no.2所示。
17、第九方面，本专利技术提供了一种扩增编码上述第一方面所述纳米抗体kr-2的核苷酸序列的引物，其特征在于，所述引物为：
18、上游引物f:ccggaattccggatgcatgtgcagctggtggag(seq id no.3所示)；
19、下游引物r:cccaagcttgggtgaggagacggtgaccagggt(seq id no.4所示)。
20、本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种特异性识别非洲猪瘟病毒的纳米抗体kr-2，所述纳米抗体kr-2是通过噬菌体展示纳米抗体文库的构建和筛选获得，为重链抗体可变区片段，具有seq id no.1所示的氨基酸序列；本专利技术所述纳米抗体与非洲猪瘟病毒具有较高的亲和力，能够特异性识别和结合非洲猪瘟病毒，可用于非洲猪瘟的诊断、预防或治疗；并且本专利技术所述的纳米抗体通过大肠杆菌表达系统表达，制备方法简单。
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1.一种特异性识别非洲猪瘟病毒的纳米抗体KR-2，所述纳米抗体KR-2的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种编码权利要求1所述纳米抗体KR-2的核酸。
3.如权利要求2所述的核酸，其特征在于，所述核酸序列如SQE ID NO.2所示。
4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求3所述的核酸序列。
5.一种免疫偶联物，其特征在于，所述免疫偶联物包括：
6.如权利要求1所述的纳米抗体KR-2或权利要求5所述的免疫偶联物在制备非洲猪瘟病毒检测试剂或试剂盒中的应用。
7.一种非洲猪瘟病毒检测试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包括权利要求1所述的纳米抗体KR-2。
8.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求1所述的纳米抗体KR-2。
9.如权利要求1所述的纳米抗体KR-2的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
10.一种扩增编码权利要求1所述纳米抗体KR-2的核苷酸序列的引物，其特征在于，所述引物为：
【技术特征摘要】
1.一种特异性识别非洲猪瘟病毒的纳米抗体kr-2，所述纳米抗体kr-2的氨基酸序列如seq id no.1所示。
2.一种编码权利要求1所述纳米抗体kr-2的核酸。
3.如权利要求2所述的核酸，其特征在于，所述核酸序列如sqe id no.2所示。
4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求3所述的核酸序列。
5.一种免疫偶联物，其特征在于，所述免疫偶联物包括：
6.如权利要求1所述的纳米抗体kr-2...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨吉飞，牛庆丽，王锦明，陈雯婷，张忠辉，关贵全，殷宏，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心，
类型：发明
国别省市：
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