用于治疗IIIA型粘多糖贮积病的基因疗法制造技术

本文提供一种重组AAV(rAAV)，其包括AAV衣壳和包装在其中的载体基因组，其中所述载体基因组包括AAV 5'反向末端重复序列(ITR)、编码任选地包括稳定化氨基酸变化的功能性hSGSH的工程化核酸序列、引导hSGSH在靶细胞中表达的调节序列和AAV 3'ITR。本文还提供一种包括于配制缓冲液中的如本文所描述的rAAV的药物组合物，以及一种治疗经诊断患有MPS IIIA的人类受试者的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

技术介绍

1、iiia型粘多糖贮积病(mpsiiia、mpsiiia或a型沙费利波综合征(sanfilipposyndrome typea))是一种常染色体隐性遗传病，其由参与葡糖胺聚糖(gag)硫酸乙酰肝素的溶酶体分解代谢的酶n-磺基葡糖胺磺基水解酶(sgsh)的缺乏引起。这种缺陷导致未降解的硫酸乙酰肝素以及神经节苷脂gm2和gm3在中枢神经系统中的细胞内积累，进而导致神经元功能障碍和神经炎症。所述疾病最初表现为3岁左右的认知迟缓，随后出现异常多动和攻击性行为。随着疾病的进展，随后在第一个十年间丧失运动和神经功能，死亡年龄中位数为15岁。

2、药物用于缓解症状(例如，用于癫痫发作的抗惊厥药)和提高生活质量。造血干细胞移植似乎并未显著改善神经心理恶化。针对mpsiii缺陷的重组酶是可用的，但酶替代疗法(ert)的试验在改善预后方面并不有利，因为所述酶类无法进入中枢神经系统。参见例如格尔曼l德芬迪(germaineldefendi).iii型粘多糖贮积病的遗传学(geneticsofmucopolysaccharidosistypeiii.)《本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus；rAAV)，其包括腺相关病毒(AAV)衣壳和载体基因组，其中所述载体基因组包括AAV 5'反向末端重复序列(inverted terminal repeat；ITR)、表达盒和AAV 3'ITR，其中所述表达盒包括编码功能性人类N-磺基葡糖胺磺基水解酶(hSGSH)的工程化核酸序列，其中所述hSGSH编码序列包括信号肽序列和成熟hSGSH编码序列，其中所述成熟hSGSH编码具有SEQ ID NO:16序列的核酸序列或(a)与其至少85％一致的编码SEQ ID NO:23的核酸序列或(b)与其至少...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus；raav)，其包括腺相关病毒(aav)衣壳和载体基因组，其中所述载体基因组包括aav 5'反向末端重复序列(inverted terminal repeat；itr)、表达盒和aav 3'itr，其中所述表达盒包括编码功能性人类n-磺基葡糖胺磺基水解酶(hsgsh)的工程化核酸序列，其中所述hsgsh编码序列包括信号肽序列和成熟hsgsh编码序列，其中所述成熟hsgsh编码具有seq id no:16序列的核酸序列或(a)与其至少85％一致的编码seq id no:23的核酸序列或(b)与其至少99％一致的编码seq id no:23的核酸序列，其中所述hsgsh编码序列可操作地连接到引导所述hsgsh在细胞中表达的调控序列。

2.根据权利要求1所述的raav，其中与seq id no:1699％一致的所述成熟hsgsh编码序列是编码seq id no:23的seq id no:22(hsgsh.a482y-e488v)。

3.根据权利要求1所述的raav，其中所述成熟hsgsh编码序列是seq id no:16。

4.根据权利要求1所述的raav，其中所述成熟hsgsh编码序列具有seq id no:16序列的核酸序列或与其85％一致的编码seq id no:23的核酸序列。

5.根据权利要求1所述的raav，其中所述信号肽序列是天然信号序列，所述天然信号序列具有seq id no:31的核酸序列或与其至少约95％一致的编码seq id no:32的序列。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的raav，其中所述hsgsh编码序列进一步包括与所述hsgsh的氨基末端的编码序列融合的外源信号序列。

7.根据权利要求6所述的raav，其中所述外源信号序列是bip信号肽序列，其具有seqid no:29的核酸序列或与其至少约95％一致的编码seq id no:30的序列。

8.根据权利要求6或7所述的raav，其中包括所述bip信号肽的所述hsgsh编码序列具有seq id no:18的核酸序列或与其至少约95％一致的编码seq id no:19的序列。

9.根据权利要求6或7所述的raav，其中包括所述bip信号肽的所述hsgsh具有seq idno:24的核酸序列或与其至少约95％一致的编码seq id no:25的序列。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的raav，其中所述hsgsh编码序列进一步包括与所述hsgsh的羧基末端的编码序列融合的vigf2肽序列。

11.根据权利要求10所述的raav，其中所述hsgsh编码序列包括所述外源信号序列在5'端且包括所述vigf2在3'端。

12.根据权利要求11所述的raav，其中包括所述bip信号序列和所述vigf2肽的所述hsgsh编码序列具有seq id no:20的核酸序列或与其至少约95％一致的编码seq id no:21的序列。

13.根据权利要求11所述的raav，其中包括所述bip信号序列和所述vigf2肽的所述hsgsh编码序列具有seq id no:26的核酸序列或与其至少约95％一致的编码seq id no:27的序列。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的raav，其中所述调控序列包括含有cmv ie增强子和鸡β肌动蛋白(cb)启动子的cb7启动子。

15.根据权利要求1至13中任一项所述的raav，其中所述调控序列进一步包括kozak序列、内含子、增强子、tata信号和polya序列中的一者或多者。

16.根据权利要求15所述的raav，其中所述调控序列包括鸡β肌动蛋白内含子、兔球蛋白聚腺苷酸化序列中的一者或多者。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的raav，其中所述调控序列进一步包括突变wpre元件。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的raav，其中所述raav载体基因组包括seq idno:7的核酸序列(cb7.ci.bip.hsgshcov1-a482y_e488v.vigf2.wpre.rbg)。

19.根据权利要求1至17中任一项所述的raav，其中所述载体基因组进一步包括至少一个、两个、三个、四个或更多个串联重复的背根神经节(dorsalroot ganglion；drg)特异性mirna靶序列，其中所述至少一个、两个、三个、四个或更多个串联重复包括至少第一mirna靶序列、至少第二mirna靶序列、至少第三mirna靶序列和/或至少第四mirna靶序列。

20.根据权利要求19所述的raav，其中所述mirna靶序列包括靶向mir182的至少第一mirna靶序列、至少第二mirna靶序列、至少第三mirna靶序列和/或至少第四mirna靶序列。

21.根据权利要求19所述的raav，其中所述mirna靶序列包括靶向mir183的至少第一mirna靶序列、至少第二mirna靶序列、至少第三mirna靶序列和/或至少第四mirna靶序列。

22.根据权利要求19或20所述的raav，其中表达盒mrna或dna正链的所述至少第一、至少第二、至少第三和/或至少第四mirna靶序列的所述mirna靶序列是agtgtgagttctaccattgccaaa(mir182,seq id no:47)。

23.根据权利要求19或21所述的raav，其中所述表达盒mrna或dna正链的所述至少第一、至少第二、至少第三和/或至少第四mirna靶序列的所述mirna靶序列是agtgaattctaccagtgccata(mir183,seq id no:28)。

24.根据权利要求1至17或19至22中任一项所述的raav，其中所述载体基因组进一步包括至少八个串联重复，所述至少八个串联重复包括可以相同或不同的并且靶向mir183或mir182的至少第一、至少第二、至少第三、至少第四、至少第五、至少第六个、至少第七和至少第八mirna靶序列。

25.根据权利要求24所述的raav，其中所述至少八个串联重复包括至少四个串联重复的背根神经节(drg)特异性mirna182靶序列和至少四个串联重复的drg特异性mirna183靶序列。

26.根据权利要求24或25所述的raav，其中所述表达盒mrna或dna正链的所述至少第一、至少第二、至少第三、至少第四、至少第五、至少第六、至少第七和/或至少第八mirna靶序列的所述drg特异性mirna靶序列是：(i)agtgaattctaccagtg ccata(mir183，seq id no:28)；和(ii)agtgtgagttctaccattgccaaa(mir182，seq id no:47)。

27.根据权利要求24至26中任一项所述的raav，其中所述表达盒mrna或dna正链的所述至少第一、至少第二、至少第三和/或至少第四mirna靶序列的所述drg特异性mirna靶序列是agtgtgagttctaccattgccaaa(mir182,seq id no:47)，且所述表达盒mrna或dna正链的所述至少第五、至少第六、至少第七和/或至少第八mirna靶序列的所述drg特异性mirna靶序列是agtgaattctaccagtgcc ata(mir1...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·霍尔多瓦，J·M·威尔逊，L·拉苏利泰勒，H·董，S·图斯克，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚州大学信托人，
类型：发明
国别省市：