一种热稳定性和活性提高的Phi29 DNA聚合酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种热稳定性和活性提高的Phi29DNA聚合酶突变体及其应用，该突变体基于SEQ ID NO.1所示的Phi29DNA聚合酶中氨基酸突变形成，在高温条件下展现了显著提升的热稳定性和活性。本发明专利技术不仅确保了酶在高温应用中的结构完整性和功能活性，而且提高了合成反应的速率和产量。此外，提高的热稳定性和活性还使得该突变体能够适应更广泛的操作条件，拓展了其在生物技术和分子生物学领域的应用范围。同时，通过减少高温条件下所需的酶量，本发明专利技术的突变体也有助于降低生产成本，提高经济效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，提供一种热稳定性和活性提高的phi29 dna聚合酶突变体及其应用。

技术介绍

1、phi29 dna聚合酶，作为一种嗜温dna聚合酶，源自bacillus subtilis噬菌体phi29，因其在dna合成和扩增过程中展现出的高保真度、链置换活性和持续合成能力而受到广泛认可。该酶特别适用于滚环扩增(rca)和多重置换扩增(mda)技术，为基因组学、分子诊断、药物研发等领域提供了强有力的工具。

2、phi29 dna聚合酶属于dna聚合酶的真核型家族(b家族)。phi29 dna聚合酶含有572个氨基酸，与其他b族dna聚合酶相比，其不仅包含常见的手掌(palm)、拇指(thumb)、手指(finger)和外切结构域(exo domain)，还具有两个称作tpr1和tpr2的亚结构域。tpr1有助于在下游模板dna周围形成狭窄通道，使得dna在第二条链进入聚合酶的活性位点之前就发生解离；此外palm、thumb、tpr1和tpr2结构域在上游形成圆圈状结构，增强了dna结合的稳定性。这些结构特征确保了phi29 dna聚合酶本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种热稳定性和活性提高的Phi29 DNA聚合酶突变体，其特征在于，是在如SEQ IDNO.1所示野生型Phi29 DNA聚合酶氨基酸序列的基础上进行以下点位的突变得到：

2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

3.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体还包括以下任一个或多个点位的突变：

4.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体具有表1所示点位的突变；

5.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体具有表2所示点位的突变；>

6.根据权利...

【技术特征摘要】

1.一种热稳定性和活性提高的phi29 dna聚合酶突变体，其特征在于，是在如seq idno.1所示野生型phi29 dna聚合酶氨基酸序列的基础上进行以下点位的突变得到：

2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如seq idno.2所示。

3.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体还包括以下任一个或多个点位的突变：

4.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体具有表1所示点位的突变；

5.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体具...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈俊，冯凡，吴邦昊，刘灏，谈攀，何静，刘文丰，毛勇，
申请(专利权)人：上海天鹜科技有限公司，
类型：发明
国别省市：