一种肺肝癌预转移龛体外实验体系的建立方法技术

本发明专利技术属于生物工程领域，提供了一种肝癌肺预转移龛体外实验体系的建立方法，实验体系以非接触共培养的方式，在Millicell小室下室先将骨髓细胞诱导分化成MDSCs，同时在Millicell小室上室预包被肺硬度基底培养肺成纤维细胞，并以高硬度基底生长肝癌细胞分泌外泌体处理上室的肺成纤维细胞，从而巧妙地实现肺预转移龛内肺成纤维细胞与募集分化免疫抑制细胞共培养，较好地模拟再现了生物力学信号诱导下的肺预转移龛微环境中肺成纤维细胞的真实病理生长状态，为从生物力学角度认识原发瘤对远端预转移龛的调控，探索肝癌肺预转移龛新特征，以及龛内固有定植细胞与募集分化免疫抑制细胞相互作用机制提供了一种较理想的新型实验研究平台。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程领域，涉及一种细胞培养技术，具体涉及一种肝癌肺预转移龛体外实验体系的建立方法，该实验体系巧妙地实现了龛内固有定植肺成纤维细胞与募集分化免疫抑制细胞共培养，较好地模拟再现了生物力学信号诱导下的肺预转移龛微环境中肺成纤维细胞的真实病理生长状态，为从生物力学角度认识原发瘤对远端预转移龛的调控，探索肝癌肺预转移龛新特征，以及龛内固有定植细胞与募集分化免疫抑制细胞相互作用机制提供了一种较理想的新型实验研究平台。

技术介绍

1、肿瘤细胞在靶器官粘附定植生长被认为是转移后期阶段最重要环节，决定转移的最终实现。而循环肿瘤细胞(“种子”)能否成功定植很大程度上取决于定植前原发瘤对靶器官微环境(“土壤”)的重塑、教育与改造。尽管经典肿瘤转移学说，如“种子与土壤学说”，“转移流体动力学说”和“转移瀑布学说”，从转移的非随机性、转移途径与转移多因素多阶段对实体瘤转移进行了较好的解释，但均缺乏将原发瘤与转移灶直接联系起来的“桥梁”。2005年，kaplan等人提出“预转移龛”新理论，认为原发瘤在循环肿瘤细胞(circulating tumorcells,ctc本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种肝癌肺预转移龛体外实验体系的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中分离纯化BMCs指得是从小鼠股骨和胫骨骨髓中分离纯化BMCs，取2×106BMCs培养于6孔Millicell共培养小室的下室，外源加入40ng/mLIL-6和40ng/ml GM-CSF，诱导分化48h，使BMCs分化为MDSCs。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中在Millicell小室上室预包被肺硬度基底培养肺成纤维细胞指得是按照1:10:5体积比将鼠尾I型胶原、DMEM基础培养基和LOXL2-OE-CM充分混...

【技术特征摘要】

1.一种肝癌肺预转移龛体外实验体系的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中分离纯化bmcs指得是从小鼠股骨和胫骨骨髓中分离纯化bmcs，取2×106bmcs培养于6孔millicell共培养小室的下室，外源加入40ng/mlil-6和40ng/ml gm-csf，诱导分化48h，使bmcs分化为mdscs。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中在millicell小室上室预包被肺硬度基底培养肺成纤维细胞指得是按照1:10:5体积比将鼠尾i型胶原、dmem基础培养基和loxl2-oe-cm充分混匀，并将该混合物以2ml/孔加至6孔millicell共培养小室的上室表面，37℃静置2h形成基底胶，再置4℃静置12h，形成薄层肺硬度基底(926.18pa)培养肺成纤维细胞。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中分离纯化获...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵莹莹，崔杰峰，于红梅，陈荣新，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：