基于RPA结合CRISPR/Cas12a恒温扩增技术核酸检测系统及其检测方法与应用技术方案

本发明专利技术属于生物检测技术领域，具体涉及一种基于RPA结合CRISPR/Cas12a恒温扩增技术核酸检测系统及其检测方法与应用。本发明专利技术通过将优化选择的RPA和CRISPR/Cas12a反应分离到两个不相邻的反应室中分隔进行，有助于简化操作，同时有效避免两个反应之间的相互干扰和扩增产物的污染。本发明专利技术通过设计一体化、可视化检测装置，将微流控芯片上的RPA扩增反应、CRISPR/Cas12a反应和检测结果的观察相结合，凭肉眼可直接观察到检测结果。通过设计微流控芯片将RPA和CRISPR反应检测结合在一个封闭的空间中，使加样、反应、观察等全过程实现闭管，最大限度地降低了与核酸转移相关的污染风险，具有核酸提取操作简便、耗时短、携带方便、检测可视化、密封性好的优良特性，有助于在实时现场检测中推广应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物检测，具体涉及一种基于rpa结合crispr/cas12a恒温扩增技术核酸检测系统及其检测方法与应用。

技术介绍

1、食品安全对人们的健康至关重要，食源性病原体的严重污染可能危及人类生命并造成巨大的经济损失。沙门氏菌作为一种人畜共患病原体，在自然界中广泛分布，是许多国家食物中毒的重要来源。食源性病原体的传统检测方法是金标准，需要1～2天才能产生结果，无法满足现场实时检测的需要。尽管聚合酶链式反应(pcr)和酶联免疫吸附测定(elisa)等方法取得了重大进展，但由于需要更高的操作水平和昂贵的机械设备，它在使用场景中仍然受到限制。

2、近年来，聚类规则间隔短回文重复序列(crispr)在快速检测技术中显示出显著的优势。它起源于细菌和古菌的适应性免疫系统，用于抵抗外来病毒的入侵。基于cas核酸酶的核酸检测依赖于rna介导的cas12a切割活性。当相关的dna或rna靶片段出现时，活化的cas核酸酶会不加区分地切割单链非特异性核酸序列。因此，可以通过检测非特异性单链dna荧光基团的荧光来检测靶dna。然而，在核酸检测中，在进行cas核本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于RPA结合CRISPR/Cas12a恒温扩增技术核酸检测系统，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的一种基于RPA结合CRISPR/Cas12a恒温扩增技术核酸检测系统，其特征在于，RPA反应室(2)、RPA反应液分隔室(3)以及CRISPR/Cas12a反应室(4)之间均连接设置有液体通道(13)，所述微流控芯片(1)上还设置有用于系绳穿过的穿线孔(14)。

3.根据权利要求1或2所述的一种基于RPA结合CRISPR/Cas12a恒温扩增技术核酸检测系统，其特征在于，所述RPA反应室(2)的容积≥55μL，所述RPA反应液分隔室(3)的容积≥4...

【技术特征摘要】

1.一种基于rpa结合crispr/cas12a恒温扩增技术核酸检测系统，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的一种基于rpa结合crispr/cas12a恒温扩增技术核酸检测系统，其特征在于，rpa反应室(2)、rpa反应液分隔室(3)以及crispr/cas12a反应室(4)之间均连接设置有液体通道(13)，所述微流控芯片(1)上还设置有用于系绳穿过的穿线孔(14)。

3.根据权利要求1或2所述的一种基于rpa结合crispr/cas12a恒温扩增技术核酸检测系统，其特征在于，所述rpa反应室(2)的容积≥55μl，所述rpa反应液分隔室(3)的容积≥46μl，所述crispr/cas12a反应室(4)的容积≥24μl。

4.根据权利要求1所述的一种基于rpa结合crispr/cas12a恒温扩增技术核酸检测系统，其特征在于，所述加热组件(12)包括设置在微流控芯片(1)下方的加热块(15)，所述加热块(15)的下方连接设置有温控组件(16)。

5.根据权利要求1所述的一种基于rpa结合crispr/cas12a恒温扩增技术核酸检测系统，其特征在于，所述发光组件(6)包括第二壳体(17)以及容纳腔(18)，所述容纳腔(18)的内部设置有用于提供光源...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋达峰，陈俊，孟晓波，陈俊霖，
申请(专利权)人：浙江工商大学，
类型：发明
国别省市：