一种生产石杉碱甲的方法技术

本发明专利技术提供了一种生产石杉碱甲的方法，属于生物工程技术领域。本发明专利技术提供的一种生产石杉碱甲的方法，包括如下步骤：将目的基因HsOGD1、HsOGD2和HsOGD3基因与载体连接，得到重组质粒pET22b‑OGD3‑OGD1‑OGD2；将重组质粒pET22b‑OGD3‑OGD1‑OGD2转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞，得到重组菌，并诱导目的蛋白表达；将步骤(3)得到的重组菌加入到含有Lycophlegmarinine D的反应体系中，生产石杉碱甲。本发明专利技术通过在大肠杆菌中偶联来自蛇足石杉的3个α‑酮戊二酸/Fe(II)依赖双加氧酶，通过全细胞催化的方式，完成石杉碱甲的生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程，尤其涉及一种生产石杉碱甲的方法。

技术介绍

1、石杉碱甲是治疗阿尔兹海默症的药物，为乙酰胆碱酯酶抑制剂。本品适用于良性记忆障碍，对阿尔兹海默症患者和脑器质性病变引起的记忆障碍亦有改善作用。

2、由于石杉碱甲显著的疗效，长期以来，一直受到人们的关注和研究。石杉碱甲在美国进入了三期临床研究，在中国已获批上市。由于石杉碱甲在蛇足石杉中的含量仅为万分之一左右，且蛇足石杉的生长周期较长，所以石杉碱甲的化学合成是目前获得该药物的主要途径。

3、现有文献报道，来自马尾杉属植物phlegmariurus tetrastichus的3个α-酮戊二酸/fe(ii)依赖双加氧酶参与了石杉碱甲的生物合成。因此，寻找一种利用上述酶快速合成石杉碱甲的方法，具有更广泛的应用价值。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于提供一种生产石杉碱甲的方法，通过在大肠杆菌中偶联来自蛇足石杉的3个α-酮戊二酸/fe(ii)依赖双加氧酶ogd1、ogd2和ogd3，通过全细胞催化的方式，从而完成目标产物石杉本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种生产石杉碱甲的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述HsOGD1的基因序列如SEQ IDNO：6所示，所述HsOGD2的基因序列如SEQ ID NO：9所示，所述HsOGD3的基因序列如SEQ IDNO：3所示。

3.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述载体为pET-22b。

4.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述重组菌为含pET-22b-OGD3-OGD1-OGD2重组质粒的BL21(DE3)。

5.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(4...

【技术特征摘要】

1.一种生产石杉碱甲的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述hsogd1的基因序列如seq idno：6所示，所述hsogd2的基因序列如seq id no：9所示，所述hsogd3的基因序列如seq idno：3所示。

3.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述载体为pet-22b。

4.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨盟权，殷全玉，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：