融合蛋白、包含其的泛素化系统及其应用技术方案

本发明专利技术公开了一种融合蛋白、包含其的泛素化系统及其应用。所述融合蛋白包含E3连接酶及插入在E3连接酶的多肽；其中，所述多肽插入在所述E3连接酶的底物识别域的无规则卷曲结构上且保留所述底物识别域的结构。本发明专利技术的融合蛋白及泛素化系统可在小分子筛选及PROTAC化合物开发前针对某底物蛋白检测E3泛素连接酶是否对其有降解效果，从而节约筛选成本，提高开发效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种融合蛋白、包含其的泛素化系统及其应用。

技术介绍

1、protac（proteolysis-targeting chimeras蛋白降解靶向嵌合体）使用双特异性分子将e3连接酶与靶蛋白连接起来，从而模仿e3连接酶与天然底物的结合，并通过泛素化介导的蛋白酶体降解来降解选定的靶蛋白（如图1所示）。

2、crbn和vhl是两种广泛用于protac分子开发的e3连接酶，但它们在有效降解某些靶蛋白方面存在局限性。扩展可开发protac的e3连接酶库对于protac药物的研发至关重要，但人体中e3连接酶有600多种，其中大部分都没有开发出特异性结合的小分子。考虑到小分子开发的长周期和高花费，如果可以在没有特异性小分子或者基于这些小分子的protac分子的情况下提前评估e3连接酶降解所选靶蛋白的能力，就可以优选出有protac开发潜力的e3连接酶进行后续开发。为此，一些新的检测方法被开发了出来。如图2所示，e3连接酶报告系统（acs chem biol. 2017 oct 20;12（10）：2570）用halotag标签蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含E3连接酶及插入在E3连接酶的多肽；其中，所述多肽插入在所述E3连接酶的底物识别域的无规则卷曲结构上且保留所述底物识别域的结构；

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述E3连接酶选自APC/C、SCF、CRL3和CRL4家族的E3连接酶；

3.如权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述E3连接酶选自BTRC、FBXW7、CRBN、COP1、DCAF8、CDC20、DCAF1、DCAF13、FBXW8、DCAF6、DCAF7、DCAF12、DCAF2、FBXW2、FBXW4、FBXW5、FBXW9、FBXW1...

【技术特征摘要】

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包含e3连接酶及插入在e3连接酶的多肽；其中，所述多肽插入在所述e3连接酶的底物识别域的无规则卷曲结构上且保留所述底物识别域的结构；

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述e3连接酶选自apc/c、scf、crl3和crl4家族的e3连接酶；

3.如权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述e3连接酶选自btrc、fbxw7、crbn、cop1、dcaf8、cdc20、dcaf1、dcaf13、fbxw8、dcaf6、dcaf7、dcaf12、dcaf2、fbxw2、fbxw4、fbxw5、fbxw9、fbxw12、fbxw10、fbxw11、keap1、dcaf3、dcaf4、dcaf5、dcaf9、dcaf10、dcaf11和dcaf14；

4.如权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述连接子具有如seq id no: 9-12任一所示的氨基酸序列；

5.一种如权利要求1-4任一项所述的融合蛋白在构建泛素连接酶筛选平台或构建protac筛选平台中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述融合蛋白中的多肽与靶向所述多肽的配体结合，所述配体与靶蛋白相连，缩小e3连接酶与所述靶蛋白的空间距离，从而使所述靶蛋白携带所述e3连接酶的泛素化标记以进行泛素化降解；

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述配体为蛋白质配体。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述配体为抗体或抗原结合片段。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述抗体为单域抗体；和/或，所述抗体或其抗原结合结构域的非抗原识别域的表面无自由赖氨酸。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述抗体为重链抗体；和/或，所述抗体或其抗原结合结构域的非抗原识别域的表面的赖氨酸替换为精氨酸。

11.如权利要求10所述的应用，其特征在于，所述重链抗体包含氨基酸序列如seq idno: 2所示的cdr1、氨基酸序列如seq id no: 3所示的cdr2和氨基酸序列如seq id no: 4所示的cdr3。

12.如权利要求11所述的应用，其特征在于，所述重链抗体包含如seq id no: 6所示或与seq id no: 6具有至少90%序列同一性的氨基酸序列的可变区。

13.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述靶蛋白还连接标签蛋白；所述标签蛋白用于靶蛋白的定量检测，并免于泛素化。

14.如权利要求13所述的应用，其特征在于，所述标签蛋白为hibit；所述hibit包含如seq id no: 8所示的氨基酸序列。

15.一种泛素化系统，其特征在于，所述泛素化系统包含如权利要求1-4任一项所述的融合蛋白、靶向所述融合蛋白中的多肽的配体，以及靶蛋白；

16.如权利要求15所述的泛素化系统，其特征在于，所述配体为蛋白质配体。

17.如权利要求16所述的泛素化系统，其特征在于，所述配体为抗体或其抗原结合结构域。

18.如权利要求17所述的泛素化系统，其特征在于，所述抗体为单域抗体；和/或，所述抗体或其抗原结合结构域的非抗原识别域的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王星昊，孔莹，娄世迪，
申请(专利权)人：上海青煜医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：