【技术实现步骤摘要】
本申请属于分子生物学及作物育种，具体涉及小麦条锈病抗性位点及其开发的kasp标记。
技术介绍
1、小麦条锈病是由条形柄锈菌小麦转化型(puccinia striiformiswest.f.sp.tritici，简称pst)引起的气传性真菌病害，主要侵染小麦叶片，同时也可侵染小麦叶鞘、穗部、茎秆、颖壳及麦芒等几乎所有地上营养器官。控制小麦条锈病一直是一项艰巨的任务。化学防治可以减轻条锈病损失，但成本高昂，长期使用可对环境造成污染。因此，培育抗小麦条锈病品种被认为是最位经济、安全、有效的策略。
2、近年来，已有89个已报道的条锈病抗性基因分布在除1a染色体外的其他20条染色体上。此外，鉴定到超过300个条锈病成株抗性的数量性状位点(qtl)，b基因组抗性位点最多。由于小麦条锈病菌的迅速变异，抗性基因易于失去抗性，且部分基因可能与不良性状连锁。因此，可用于小麦条锈病抗性改良的有效基因数量相对有限。因此，寻找新的抗条锈病基因(qtl)并开发与之关联的分子标记对育种具有重要意义。目前，kasp(kompetitiveallele specific pcr)标记技术已广泛应用于小麦、水稻、玉米等多种作物的snp位点检测，省去了电泳步骤，实现了高通量的基因分型。利用小麦snp芯片产生的基因型数据，结合qtl定位和全基因组关联研究(gwas)，可将相关snp转化为kasp标记，并直接用于分子标记辅助育种，以提高育种效率。
3、兰天25是甘肃省农业科学院小麦研究所育成，苗期对条锈病混合菌免疫，成株期对条中29、条中31、水
技术实现思路
1、本申请要解决的技术问题是：如何鉴定或辅助鉴定小麦的条纹病抗性。
2、为解决上述技术问题，本申请提供应用，所述应用可为检测ax-111915032位点的多态性或基因型的物质在下述a1)-a6)中的应用：
3、a1)鉴定或辅助鉴定小麦条锈病抗性；
4、a2)制备鉴定或辅助鉴定小麦条锈病抗性的产品；
5、a3)筛选或辅助筛选条锈病抗性小麦品种；
6、a4)制备筛选或辅助筛选条锈病抗性小麦品种的产品；
7、a5)小麦育种和/或辅助育种；
8、a6)制备小麦育种和/或辅助育种的产品；
9、所述ax-111915032位点是小麦基因组中的一个snp位点，为seq id no.4的第37位核苷酸，其核苷酸种类为g或a。
10、本申请中，所述小麦育种的考察指标可包括小麦的条锈病抗性。
11、本申请中，所述育种的目的包括培育小麦条锈病抗性高(小麦条锈病抗性高于亲本)的小麦。
12、所述ax-111915032位点的基因型可为gg基因型、aa基因型或ag基因型。
13、所述gg基因型表示小麦基因组中所述ax-111915032位点的核苷酸种类为g的纯合型；所述aa基因型表示小麦基因组中所述ax-111915032位点的核苷酸种类为a的纯合型；所述ag基因型表示小麦基因组中所述ax-111915032位点的核苷酸种类为g和a的杂合型。
14、进一步地，所述的应用中，所述检测ax-111915032位点的多态性或基因型的物质为：扩增包括所述ax-111915032位点在内的小麦基因组dna片段的引物组合物。
15、进一步地，所述的应用中，所述引物组合物可由核苷酸序列是seq id no.1的第22-44位的单链dna、核苷酸序列是seq id no.2的第22-45位的单链dna和核苷酸序列是seqid no.3的单链dna组成。
16、进一步地，所述的应用中，所述引物组合物可由seq id no.1所示的单链dna、seqid no.2所示的单链dna和seq id no.3所示的单链dna组成。
17、本申请还提供上述的引物组合物。
18、本申请中，所述引物组合物中的pcr引物可被标记物标记也可不被标记物标记。所述标记物指可用于提供可检测的效果且可以连接至核酸的任何原子或分子。标记物包括但不限于染料；放射性标记，诸如32p；结合部分，诸如生物素(biotin)；半抗原，诸如地高辛(dig)；发光、发磷光或发荧光部分；和单独的荧光染料或与可以通过荧光共振能量转移(fret)抑制或移动发射光谱的部分组合的荧光染料。标记可以提供可通过荧光、放射性、比色、重量测定、x射线衍射或吸收、磁性、酶活性等检测的信号。标记可以是带电荷的部分(正电荷或负电荷)或可选地，可以是电荷中性的。标记可以包括核酸或蛋白序列或由其组合，只要包含标记的序列是可检测的。在一些实施方案中，核酸在没有标记的情况下直接检测(例如，直接读取序列)。
19、进一步地，所述引物组合物可用于鉴定或辅助鉴定小麦条锈病抗性。
20、本申请还提供含有上述组合物的试剂或试剂盒。
21、本申请还提供dna分子，所述dna分子为核苷酸序列是seq id no.4所示的dna分子。
22、本申请还提供鉴定或辅助鉴定小麦条锈病抗性的方法，所述方法包括使用检测ax-111915032位点的多态性或基因型的物质检测ax-111915032位点的基因型，根据待测小麦ax-111915032位点的基因型鉴定或辅助鉴定小麦条锈病抗性；
23、所述ax-111915032位点是小麦基因组中的一个snp位点，是seq id no.4的第37位核苷酸，其核苷酸种类为g或a。
24、进一步地，所述的方法中，所述检测待测小麦的上述ax-111915032位点的基因型的方法包括以待鉴定小麦基因组dna为模板，利用上述的引物组合物进行pcr扩增，得到pcr产物；根据pcr产物的测序结果或荧光信号确定所述ax-111915032位点的基因型。
25、进一步地，所述方法具体包括下述操作步骤：
26、s1)提取待测小麦的基因组dna；
27、s2)以s1)提取的基因组dna为模板，以上述引物组合物为扩增引物，进行pcr扩增，获得pcr扩增产物；
28、s3)根据pcr扩增产物的ax-109906455位点的基因型判断或辅助判断待测小麦的条锈病抗性；
29、进一步地，上述的方法中，s3)步骤中可根据所述pcr产物的测序结果或荧光显色判断ax-109906455位点的基因型。
30、进一步地，所本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.应用，其特征在于，所述应用为检测AX-111915032位点的多态性或基因型的物质在下述A1)-A6)中的应用：
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测AX-111915032位点的多态性或基因型的物质为扩增包括所述AX-111915032位点在内的小麦基因组DNA片段的引物组合物。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述引物组合物由核苷酸序列是SEQ IDNo.1的第22-45位的单链DNA、核苷酸序列是SEQ ID No.2的第22-45位的单链DNA和核苷酸序列是SEQ ID No.3的单链DNA组成。
4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述引物组合物由SEQ IDNo.1所示的单链DNA、SEQ ID No.2所示的单链DNA和SEQ ID No.3所示的单链DNA组成。
5.权利要求2-4中任一项所述的引物组合物。
6.含有权利要求5所述组合物的试剂。
7.DNA分子，所述DNA分子为核苷酸序列是SEQ ID No.4所示的DNA分子。
8.鉴定或辅助
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述检测待测小麦的权利要求1中所述AX-111915032位点的基因型的方法包括以待鉴定小麦基因组DNA为模板，利用权利要求4中所述的引物组合物进行PCR扩增，得到PCR产物；根据PCR产物的测序结果或荧光信号确定所述AX-111915032位点的基因型。
10.小麦育种的方法，其特征在于，所述方法包括选择权利要求1中所述AX-111915032位点的基因型为GG的小麦作为亲本进行育种，所述GG基因型表示小麦基因组中所述AX-111915032位点的核苷酸种类为G的纯合型。
...【技术特征摘要】
1.应用，其特征在于，所述应用为检测ax-111915032位点的多态性或基因型的物质在下述a1)-a6)中的应用：
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测ax-111915032位点的多态性或基因型的物质为扩增包括所述ax-111915032位点在内的小麦基因组dna片段的引物组合物。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述引物组合物由核苷酸序列是seq idno.1的第22-45位的单链dna、核苷酸序列是seq id no.2的第22-45位的单链dna和核苷酸序列是seq id no.3的单链dna组成。
4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述引物组合物由seq idno.1所示的单链dna、seq id no.2所示的单链dna和seq id no.3所示的单链dna组成。
5.权利要求2-4中任一项所述的引物组合物。
6.含有权利要求5所述组合物的试剂。
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【专利技术属性】
技术研发人员：杨芳萍，展宗斌，郭莹，张雪婷，鲁清林，化青春，
申请(专利权)人：甘肃省农业科学院小麦研究所，
类型：发明
国别省市：
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