一种蛋白核小球藻藻种保藏方法技术

本发明专利技术公开了一种蛋白核小球藻藻种长期保藏方法。它将蛋白核小球藻藻液保存于两相保护剂中，下层为复合水相，上层为液体石蜡层油相。复合水相保护剂包含以下成分：甘油、海藻糖、微量无机盐元素的混合保护剂组分。采用梯度降温法低温冷冻保存。3年保藏的细胞存活率达到80%以上。本方法操作简单，成本低，保存时间长，不易污染，能很好地维持蛋白核小球藻活性，易复苏，对实验及生产保藏蛋白核小球藻藻种具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于蛋白核小球藻生物的藻种保藏方法，特别是涉及一种可以长期保存蛋白核小球藻藻种的方法。

技术介绍

1、蛋白核小球藻(chlorella pyrenoidosa)为绿藻门蛋白核小球藻属普生性单细胞，是一种球形单细胞淡类，含有丰富的蛋白质、维生素、矿物质、食物纤维、核酸及叶绿素等，被广泛应用于食品、医药、农业、环保、美容和水产养殖等行业。近年来蛋白核小球藻被国家卫生部批准为新资源食品, 以及其在污水处理、新型生物能源等多领域的开发利用，成为目前新资源研究和应用的热点。

2、微藻细胞目前常用的保藏方法为连续传代、常温光照保藏等。由于微藻细胞特殊的生理特性和较之原核细胞更为复杂高等的核膜结构，低温、干燥等保藏损伤远大于普通微生物种类，易出现细胞结构损伤、生物活性丧失、复苏困难等问题。针对微藻细胞保藏方法的研究，cn107699492a公开了一种采用特殊琼脂平板培养基振荡培养小球藻，随后进行密封、倒置、低温弱光保藏，该方法需要制备土壤浸提液，用96孔平板保藏多个藻种，保藏期达到12个月。cn108384721a提供了一种采用絮凝沉降浓缩小球藻，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种蛋白核小球藻藻种保藏方法，其特征在于，将蛋白核小球藻藻体细胞保存于两相保护剂中，下层为复合水相保护剂，上层为液体石蜡层油相；采用梯度降温法低温冷冻保藏；复合水相保护剂包含以下成分：甘油、海藻糖和微量无机盐元素。

2.根据权利要求1所述的蛋白核小球藻藻种保藏方法，其特征在于，保存时将蛋白核小球藻藻体细胞加入复合水相保护剂，再加入液体石蜡置于复合水相保护剂上层。

3.按照权利要求1所述的蛋白核小球藻藻种保藏方法，所述复合水相保护剂包含以下成分：甘油10～20%，海藻糖1～3%，二水氯化钙 0.1～0.3%，七水硫酸亚铁0.001～0.002%，七水硫酸镁0.1...

【技术特征摘要】

1.一种蛋白核小球藻藻种保藏方法，其特征在于，将蛋白核小球藻藻体细胞保存于两相保护剂中，下层为复合水相保护剂，上层为液体石蜡层油相；采用梯度降温法低温冷冻保藏；复合水相保护剂包含以下成分：甘油、海藻糖和微量无机盐元素。

2.根据权利要求1所述的蛋白核小球藻藻种保藏方法，其特征在于，保存时将蛋白核小球藻藻体细胞加入复合水相保护剂，再加入液体石蜡置于复合水相保护剂上层。

3.按照权利要求1所述的蛋白核小球藻藻种保藏方法，所述复合水相保护剂包含以下成分：甘油10～20%，海藻糖1～3%，二水氯化钙 0.1～0.3%，七水硫酸亚铁0.001～0.002%，七水硫酸镁0.1～0.2%。

4.根据权利要求1所述的蛋白核小球藻藻种保藏方法，所述复合水相保护剂包含以下成分：甘油15%，海藻糖2%，二水氯化钙0.2%，七水硫酸亚铁0.0015%，七水硫酸镁0.15%。

5.根据权利要求1所述的蛋白核小球藻藻种保藏方法，其特征在于，所述梯度降温法低温冷冻保藏为：25℃→4℃，冷藏保存3小时；4℃→-20℃，低温保存3小时；-20℃→-80℃，最后移至-80℃长期保存。

6.根据权利要求1所述的蛋白核小球藻藻种保藏方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：培养蛋白核...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝惠云，王耀耀，任风芝，张雪霞，宋盼，王亚莉，李红珍，柴力彬，
申请(专利权)人：华北制药集团新药研究开发有限责任公司，
类型：发明
国别省市：