【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、水疱性口炎病毒(vsv)是属于棒状病毒科的水泡病毒属的包膜负链rna病毒。它是一种可感染昆虫、牛、马和猪的虫媒病毒。vsv基因组编码五种结构蛋白，当中包括单一跨膜糖蛋白(g)。糖蛋白为典型i型膜糖蛋白，其具有氨基端信号肽、约450个氨基酸的胞外域(ectodomain)、单一α螺旋状跨膜区段和小病毒内羧基端域。信号肽在内质网内腔中裂解并且天然糖蛋白包括胞外域、跨膜域和病毒内域。
2、g在病毒感染的初始步骤期间发挥关键作用(molecular and cellular aspectsof rhabdovirus entry.viruses 4,117-139.)，其特此通过引用整体并入。首先，其负责病毒附接至特异性受体。在结合后，病毒粒子通过网格蛋白介导的胞吞途径进入细胞。在胞吞囊泡的酸性环境中，g触发病毒与胞内体膜之间的融合，从而释放胞质液中的基因组以用于后续感染步骤。融合通过低ph诱导的从融合前构象至融合后构象(其都为三聚体)的巨大结构转变而催化(roche,s.,bressanelli,s.,rey,f....
【技术保护点】
1.一种VSV-G多肽，所述VSV-G多肽包含对应于SEQ ID NO:2的位置182处突变的突变。
2.如权利要求1所述的VSV-G多肽，其中所述蛋白质包含在位置182处具有突变的SEQID NO:2的氨基酸序列并且与SEQ ID NO:2具有至少95％同一性。
3.如权利要求1或2所述的VSV-G多肽，其中所述多肽包含相较于SEQ ID NO:2的I182E或I182D突变。
4.如权利要求1-3中任一项所述的VSV-G多肽，其中所述多肽包含在位置198处具有突变的SEQ ID NO:1的氨基酸序列并且与SEQ ID NO:2具...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种vsv-g多肽，所述vsv-g多肽包含对应于seq id no:2的位置182处突变的突变。
2.如权利要求1所述的vsv-g多肽，其中所述蛋白质包含在位置182处具有突变的seqid no:2的氨基酸序列并且与seq id no:2具有至少95％同一性。
3.如权利要求1或2所述的vsv-g多肽，其中所述多肽包含相较于seq id no:2的i182e或i182d突变。
4.如权利要求1-3中任一项所述的vsv-g多肽，其中所述多肽包含在位置198处具有突变的seq id no:1的氨基酸序列并且与seq id no:2具有至少70％同一性。
5.如权利要求1-4中任一项所述的vsv-g多肽，其中所述多肽包含相较于seq id no:2的序列的对应于i182d或i182e的突变。
6.如权利要求1-5中任一项所述的vsv-g多肽，其中所述多肽包含与seq id no:4的序列至少95％同一的氨基酸序列。
7.如权利要求1-5中任一项所述的vsv-g多肽，其中所述多肽包含seq id no:4的氨基酸序列。
8.如权利要求1-5中任一项所述的vsv-多肽，其中所述多肽包含与seq id no:5的序列至少95％同一的氨基酸序列。
9.如权利要求1-5中任一项所述的vsv-g多肽，其中所述多肽包含seq id no:5的氨基酸序列。
10.如权利要求1-9中任一项所述的vsv-g多肽，所述vsv-g多肽还包含所述vsv-g蛋白相较于seq id no:2对应于位置8、10、47、209和/或354的突变。
11.如权利要求1-10中任一项所述的vsv-g多肽，所述vsv-g多肽还包含对应于seq idno:2中的位置8的突变，其中所述突变为除y外不同于seq id no:2中所述位置处所示氨基酸的任何氨基酸。
12.如权利要求1-11中任一项所述的vsv-g多肽，所述vsv-g多肽还包含对应于seq idno:2中的位置209的突变，其中所述突变为除h外不同于seq id no:2中所述位置处所示氨基酸的任何氨基酸。
13.如权利要求1-12中任一项所述的vsv-g多肽，所述vsv-g多肽还包含对应于seq idno:2中的位置47的突变，其中所述突变为除k或r外不同于seq id no:2中所述位置处所示氨基酸的任何氨基酸。
14.如权利要求1-13中任一项所述的vsv-g多肽，所述vsv-g多肽还包含对应于seq idno:2中的位置354的突变，其中所述突变为除k或r外不同于seq id no:2中所述位置处所示氨基酸的任何氨基酸。
15.如权利要求1-14中任一项所述的vsv-g多肽，所述vsv-g多肽还包含对应于seq idno:2中的位置10的突变，其中所述突变为除q或n外不同于seq id no:2中所述位置处所示氨基酸的任何氨基酸。
16.如权利要求1-15中任一项所述的vsv-g多肽，其中所述蛋白质包含位置47处或位置354处、或位置47和354两处的取代，其中每个位置独立地被a、g、f、q或n取代。
17.如权利要求1-16中任一项所述的vsv-g多肽，其中所述蛋白质包含位置8处的取代，其中所述取代为h8a、h8i、h8v、h8l等。
18.如权利要求1-17中任一项所述的vsv-g多肽，其中所述蛋白质包含位置47处的取代，其中所述取代为k47q或k47n。
19.如权利要求1-18中任一项所述的vsv-g多肽，其中所述蛋白质包含取代h8a和/或k47q突变。
20.如权利要求1-19中任一项所述的vsv-g多肽，其中所述蛋白质包含q10a、q10r或q10k取代。
21.如权利要求1-20中任一项所述的vsv-g多肽，所述vsv-g多肽还包含对应于seq idno:2的位置214和/或352处突变的突变。
22.如权利要求21所述的vsv-g多肽，其中所述多肽包含t214n和/或t352a突变。
23.一种vsv-g多肽，所述vsv-g多肽包含seq id no:2的位置i182以及t214和t352中的至少一者处的取代。
24.如权利要求23所述的vsv-g多肽，其中所述多肽包含seq id no:2的位置i182、t214和t352处的取代。
25.如权利要求23或24所述的vsv-g多肽，其中位置182处的取代为i182d或i182e，位置214处的取代为t214n，并且位置352处的取代为t352a。
26.如权利要求23-25中任一项所述的vsv-g多肽，其中所述多肽包含seq id no:23、seq id no:22、seq id no:24或seq id no:25的序列。
27.如权利要求1所述的vsv-g多肽，其中所述多肽包含seq id no:23的序列。
28.如权利要求23-25中任一项所述的vsv-g多肽，其中所述多肽包含seq id no:22的序列。
29.如权利要求23-25中任一项所述的vsv-g多肽，其中所述多肽包含seq id no:24的序列。
30.如权利要求23-25中任一项所述的vsv-g多肽，其中所述多肽包含seq id no:25的序列。
31.一种核酸分子，所述核酸分子编码权利要求1-30中任一项所述的vsv-g多肽。
32.一种载体，所述载体包含权利要求31所述的核酸分子。
33.一种质粒，所述质粒包含权利要求31所述的核酸分子。
34.一种病毒颗粒，所述病毒颗粒包含权利要求1-30中任一项所述的多肽。
35.如权利要求34所述的病毒颗粒，所述病毒颗粒还包含靶向部分。
36.如权利要求34或35所述的病毒颗粒，其中所述病毒颗粒为假型慢病毒。
37.如权利要求34-36中任一项所述的病毒颗粒，其中所述病毒颗粒还包含编码所关注异源分子的核酸分子。
38.如权利要求37所述的病毒颗粒，其中所述所关注异源分子为sirna、shrna、非编码rna(例如crispr系统的引导rna)、肽、多肽、蛋白质、病毒有效负载、病毒基因组，或其组合。
39.如权利要求37或38所述的病毒颗粒，其中所述所关注异源分子为嵌合抗原受体(“car”)。
40.如权利要求39所述的病毒颗粒，其中所述嵌合抗原受体包含结合于cd20的抗原结合域。
41.如权利要求34-40中任一项所述的病毒颗粒，其中所述靶向部分结合于免疫细胞、t细胞、b细胞、nk细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞、癌细胞、cd3+t细胞、cd4+t细胞、cd7+t细胞、cd8+t细胞、cd19+b细胞、cd19+癌细胞、cd20+b细胞、cd20+癌细胞、cd30+肺上皮细胞、cd34+造血干细胞、cd105+内皮细胞、cd105+造血干细胞、cd117+造血干细胞、cd133+癌细胞、epcam+癌细胞、glua2+神经元、glua4+神经元、造血干细胞、肝细胞、her2/neu+癌细胞、nkg2d+自然杀手细胞、slc1a3+星形细胞或slc7a10+脂肪细胞。
42.如权利要求34-41中任一项所述的病毒颗粒，其中所述靶向部分结合于：cd7、cd8、ckit(cd117)、cd4、cd3、cd5、cd6、cd2、tcrα、tcrβ、tcrγ、tcrδ、cd10、cd34、cd110、cd33、cd14、cd68、ccr7、cd62l、cd25、ccr2、ccr3、ccr4、ccr5、ccr6、ccr7或cxcr3、表达于急性白血病或淋巴瘤上但不表达于造血祖细胞上的糖基化cd43表位、表达于非造血性癌症上的糖基化cd43表位、激酶锚定蛋白4(akap-4)、肾上腺素受体β3(adrb3)、afp、间变性淋巴瘤激酶(alk)、雄激素受体、血管生成素结合细胞表面受体2(tie 2)、桥粒芯糖蛋白1(dsgl)自抗体、桥粒芯糖蛋白3(dsg3)自抗体、b7h3(cd276)、生物素、骨髓基质细胞抗原2(bst2)、bst1/cd157、癌症/睾丸抗原1(ny-eso-1)、癌症/睾丸抗原2(lage-la)、碳酸酐酶ix(ca1x)、癌胚抗原(cea)、ccctc结合因子(锌指蛋白)样蛋白(boris或印迹位点调控因子兄弟蛋白)、ccr4、cd5、cd19、cd20、cd22、cd24、cd30、cd32(fcgr2a)、cd33、cd34、cd38、cd44v6、cd72、cd79a、cd79b、cd97、cd99、cd123、cd171、cd179a、cd179b-iglll、cd200r、cd276/b7h3、cd300分子样家族成员f(cd300lf)、cdh1-cd324、cdh6、cdh17、cdh19、x染色体开放阅读框61(cxorf61)、紧密连接蛋白6(cldn6)、紧密连接蛋白18.2(cld18a2或cldn18a.2)、cmv pp65、c-myc表位标签、cripto、cs1(也称为cd2子集1或cracc或slamf7或cd319或19a24)、csf2ra(gm-csfr-α)、c型凝集素域家族12成员a(clec12a)、c型凝集素样分子1(cll-1或clecl1)、周期蛋白bl、细胞色素p450 ib 1(cyp1b 1)、dll3、ebv-ebna3c、含egf-bke模块的粘蛋白样激素受体样蛋白2(emr2)、延伸因子2突变型(elf2m)、肝配蛋白b2、肝配蛋白a型受体2(epha2)、表皮生长因子受体(egfr)、表皮生长因子受体变体iii(egfrviii)、上皮细胞粘附分子(epcam)、erg、位于染色体12p上的ets易位变异基因6(etv6-aml)、iga受体的fc片段(fcar或cd89)、fc受体样蛋白5(fcrl5)、纤维母细胞活化蛋白α(fap)、fitc、fms样酪氨酸激酶3(flt3)、叶酸受体α(fra或fr1)、叶酸受体β(frb)、滤泡刺激激素受体(fshr)、fos相关抗原1、岩藻糖基-gml、g蛋白偶联受体c类第5组成员d(gprc5d)、g蛋白偶联受体20(gpr20)、gad、神经节苷脂g2(gd2)、神经节苷脂gd3(aneu5ac(2-8)aneu5ac(2-3)bdgalp(l-4)bdglcp(l-l)cer)、神经节苷脂gm3(aneu5ac(2-3)bdclalp(l-4)bdglcp(l-l)cer)、gd3、gfrα4、糖蛋白100(gploo)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)、促性腺素激素受体(cghr或gr)、gpa33、gpnmb、gprc5d、鸟苷酸环化酶c(gcc)、热休克蛋白70-2突变型(mut hsp70-2)、甲型肝炎病毒细胞受体1(havcr1)、globoh糖基神经酰胺(globoh)的六糖部分、高分子量黑素瘤相关抗原(hmwmaa)、hiv1包膜糖蛋白、hla、hla-doa、hla-a、hla-a2、hla-b、hla-c、hla-dm、hla-dob、hla-dp、hla-dq、hla-dr、hla-g、htlvl-tax、人类乳头状瘤病毒e6(hpv e6)、人类乳头状瘤病毒e7(hpv e7)、人类端粒酶逆转录酶(htert)、ige、il13ra2、ill lra、免疫球蛋白λ样多肽1(igll1)、甲型流感血球凝集素(ha)、胰岛素样生长因子1受体(igf-i受体)、白介素11受体α(il-llra)、白介素13受体亚基α-2(il-13ra2或cd213a2)、肠道羧酸酯酶、kit(cd117)、kshv k8.1、kshv-gh、lamp1、豆荚蛋白、白细胞免疫球蛋白样受体亚家族a成员2(lilra2)、白细胞相关免疫球蛋白样受体1(lair1)、黄体生成素受体(lhr)、路易斯(y)抗原、lews ag、livl、基因座k 9(ly6k)、低导电氯离子通道、淋巴细胞抗原6复合体、淋巴细胞抗原75(ly75)、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(lck)、乳腺分化抗原(ny-br-1)、t细胞识别的黑素瘤抗原1(melana或marti)、黑素瘤相关抗原1(mage-a1)、黑素瘤癌症睾丸抗原-1(mad-ct-1)、黑素瘤癌症睾丸抗原-2(mad-ct-2)、黑素瘤细胞凋亡抑制剂(ml-iap)、间皮素、mpl、粘蛋白1细胞表面相关蛋白(muc1)、n-乙酰基葡糖胺基-转移酶v(na17)、粘连蛋白4、神经细胞粘附分子(ncam)、nkg2d、nybr1、o-乙酰基-gd2神经节苷脂(oacgd2)、嗅觉受体51e2(or51e2)、由断裂点簇集区(bcr)和阿贝尔森鼠类白血病病毒致癌基因同源物1(abl)组成的致癌基因融合蛋白(bcr-abl)、p53突变体、配对盒蛋白pax-3(pax3)、配对盒蛋白pax-5(pax5)、泛连接蛋白3(panx3)、pdl1、p-糖蛋白、胎盘特异性蛋白1(plac1)、血小板衍生生长因子受体β(pdgfr-β)、聚唾液酸、前顶体素结合蛋白sp32(oy-tes1)、前列腺酶、前列腺癌肿瘤抗原-1(pcta-l或半乳糖凝集素8)、前列腺干细胞抗原(psca)、前列腺特异性膜抗原(psma)、前列腺酸性磷酸酶(pap)、前列腺特异性蛋白、蛋白酶丝氨酸21(睾蛋白或prss21)、蛋白酶体(prosome macropain)亚基β9型(lmp2)、ptk7、ras g12v、ras同源物家族成员c(rhoc)、大鼠肉瘤(ras)突变体、高度糖化终产物受体(rage-1)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)、受体酪氨酸蛋白激酶erbb2或her-22/neu、肾广泛存在蛋白1(ru1)、肾广泛存在蛋白2(ru2)、肉瘤易位断裂点、丝氨酸2(tmprss2)ets融合基因、唾液酸基路易斯粘附分子(sle)、slamf4、slamf6、slea(ca19.9或唾液酸基路易斯抗原)、精子蛋白17(spa17)、t细胞识别的鳞状细胞癌抗原3(sart3)、阶段特异性胚抗原-4(ssea-4)、steap1、存活素、滑膜肉瘤x断裂点2(ssx2)、tcrγ替代阅读框蛋白(tarp)、tcr-β1链、tcr-β2链、tcr-δ链、tcr-γ链、tcrγ-δ、端粒酶、tgfβr2、tnt抗体识别的抗原、促甲状腺激素受体(tshr)、timl-/hvcr1、组织因子1(tf1)、tn ag、tn抗原((tn ag)或(galnaca-ser/thr))、tnf受体家族成员b细胞成熟(bcma)、转谷氨酰胺酶5(tgs5)、跨膜蛋白酶、trop2、肿瘤内皮标志物1(tem1/cd248)、肿瘤内皮标志物7相关蛋白(tem7r)、肿瘤蛋白p53(p53)、肿瘤相关糖蛋白72(tag72)、酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白2(trp-2)、尿溶蛋白2(upk2)、血管内皮生长因子受体2(vegfr2)、v-myc禽类髓细胞瘤病病毒致癌基因神经母细胞瘤衍生同源物(mycn)、威尔姆斯肿瘤蛋白(wt1)，或x抗原家族成员1a(xage1)。
43.如权利要求42所述的病毒颗粒，其中所述靶向部分结合于cd7。
44.如权利要求43所述的病毒颗粒，其中结合于cd7的所述靶向部分包含含有与seq idno:52具有至少90％序列同一性、与seq id no:52具有至少95％序列同一性、与seq id no:52具有至少99％序列同一性的序列，或如seq id no:52所阐述序列的多肽。
45.如权利要求42所述的病毒颗粒，其中所述靶向部分结合于cd8。
46.如权利要求45所述的病毒颗粒，其中结合于cd8的所述靶向部分包含含有与seq idno:69具有至少90％序列同一性、与seq id no:69具有至少95％序列同一性、与seq id no:69具有至少99％序列同一性的序列，或如seq id no:69所阐述序列的多肽。
47.如权利要求34-46中任一项所述的病毒颗粒，其中所述靶向部分为抗体、scfv抗体、抗原结合域、锚蛋白重复序列(例如darpin)、vhh域抗体、纳米抗体、单域抗体、fn3域，或其任何组合。
48.如权利要求34-47中任一项所述的病毒颗粒，其中所述靶向部分经由以下附接至所述病毒表面：
49.如权利要求48所述的病毒颗粒，其中所述茎包含cd8或cd28跨膜域。
50.一种将异源分子递送至目标细胞的方法，所述方法包括使所述细胞与病毒载体接触，所述病毒载体包含：
51.如权利要求45所述的方法，其中所述目标细胞为免疫细胞、t细胞、b细胞、nk细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞、癌细胞、cd3+t细胞、cd4+t细胞、cd7+t细胞、cd8+t细胞、cd19+b细胞、cd19+癌细胞、cd20+b细胞、cd20+癌细胞、cd30+肺上皮细胞、cd34+造血干细胞、cd105+内皮细胞、cd105+造血干细胞、cd117+造血干细胞、cd133+癌细胞、epcam+癌细胞、glua2+神经元、glua4+神经元、造血干细胞、肝细胞、her2/neu+癌细胞、nkg2d+自然杀手细胞、slc1a3+星形细胞或slc7a10+脂肪细胞。
52.如权利要求50或51所述的方法，其中所述靶向部分结合于所述目标细胞上的cd7、cd8、ckit(cd117)、cd4、cd3、cd5、cd6、cd2、tcrα、tcrβ、tcrγ、tcrδ、cd10、cd34、cd110、cd33、cd14、cd68、ccr7、cd62l、cd25、ccr2、ccr3、ccr4、ccr5、ccr6、ccr7或cxcr3、表达于急性白血病或淋巴瘤上但不表达于造血祖细胞上的糖基化cd43表位、表达于非造血性癌症上的糖基化cd43表位、激酶锚定蛋白4(akap-4)、肾上腺素受体β3(adrb3)、afp、间变性淋巴瘤激酶(alk)、雄激素受体、血管生成素结合细胞表面受体2(tie 2)、桥粒芯糖蛋白1(dsgl)自抗体、桥粒芯糖蛋白3(dsg3)自抗体、b7h3(cd276)、生物素、骨髓基质细胞抗原2(bst2)、bst1/cd157、癌症/睾丸抗原1(ny-eso-1)、癌症/睾丸抗原2(lage-la)、碳酸酐酶ix(ca1x)、癌胚抗原(cea)、ccctc结合因子(锌指蛋白)样蛋白(boris或印迹位点调控因子兄弟蛋白)、ccr4、cd5、cd19、cd20、cd22、cd24、cd30、cd32(fcgr2a)、cd33、cd34、cd38、cd44v6、cd72、cd79a、cd79b、cd97、cd99、cd123、cd171、cd179a、cd179b-iglll、cd200r、cd276/b7h3、cd300分子样家族成员f(cd300lf)、cdh1-cd324、cdh6、cdh17、cdh19、x染色体开放阅读框61(cxorf61)、紧密连接蛋白6(cldn6)、紧密连接蛋白18.2(cld18a2或cldn18a.2)、cmv pp65、c-myc表位标签、cripto、cs1(也称为cd2子集1或cracc或slamf7或cd319或19a24)、csf2ra(gm-csfr-α)、c型凝集素域家族12成员a(clec12a)、c型凝集素样分子1(cll-1或clecl1)、周期蛋白bl、细胞色素p450 ib 1(cyp1b 1)、dll3、ebv-ebna3c、含egf-bke模块的粘蛋白样激素受体样蛋白2(emr2)、延伸因子2突变型(elf2m)、肝配蛋白b2、肝配蛋白a型受体2(epha2)、表皮生长因子受体(egfr)、表皮生长因子受体变体iii(egfrviii)、上皮细胞粘附分子(epcam)、erg、位于染色体12p上的ets易位变异基因6(etv6-aml)、iga受体的fc片段(fcar或cd89)、fc受体样蛋白5(fcrl5)、纤维母细胞活化蛋白α(fap)、fitc、fms样酪氨酸激酶3(flt3)、叶酸受体α(fra或fr1)、叶酸受体β(frb)、滤泡刺激激素受体(fshr)、fos相关抗原1、岩藻糖基-gml、g蛋白偶联受体c类第5组成员d(gprc5d)、g蛋白偶联受体20(gpr20)、gad、神经节苷脂g2(gd2)、神经节苷脂gd3(aneu5ac(2-8)aneu5ac(2-3)bdgalp(l-4)bdglcp(l-l)cer)、神经节苷脂gm3(aneu5ac(2-3)bdclalp(l-4)b dglcp(l-l)cer)、gd3、gfrα4、糖蛋白100(gploo)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)、促性腺素激素受体(cghr或gr)、gpa33、gpnmb、gprc5d、鸟苷酸环化酶c(gcc)、热休克蛋白70-2突变型(mut hsp70-2)、甲型肝炎病毒细胞受体1(havcr1)、globoh糖基神经酰胺(globoh)的六糖部分、高分子量黑素瘤相关抗原(hmwmaa)、hiv1包膜糖蛋白、hla、hla-doa、hla-a、hla-a2、hla-b、hla-c、hla-dm、hla-dob、hla-dp、hla-dq、hla-dr、hla-g、htlvl-tax、人类乳头状瘤病毒e6(hpv e6)、人类乳头状瘤病毒e7(hpv e7)、人类端粒酶逆转录酶(htert)、ige、il13ra2、ill lra、免疫球蛋白λ样多肽1(igll1)、甲型流感血球凝集素(ha)、胰岛素样生长因子1受体(igf-i受体)、白介素11受体α(il-llra)、白介素13受体亚基α-2(il-13ra2或cd213a2)、肠道羧酸酯酶、kit(cd117)、kshv k8.1、kshv-gh、lamp1、豆荚蛋白、白细胞免疫球蛋白样受体亚家族a成员2(lilra2)、白细胞相关免疫球蛋白样受体1(lair1)、黄体生成素受体(lhr)、路易斯(y)抗原、lews ag、livl、基因座k 9(ly6k)、低导电氯离子通道、淋巴细胞抗原6复合体、淋巴细胞抗原75(ly75)、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(lck)、乳腺分化抗原(ny-br-1)、t细胞识别的黑素瘤抗原1(melana或marti)、黑素瘤相关抗原1(mage-a1)、黑...
【专利技术属性】
技术研发人员：R·M·罗素，P·R·约翰逊，J·I·安多尔科，M·萨奇德瓦，B·施尼普，M·马里内利，J·福斯，D·博拉尔，
申请(专利权)人：因特尔乌斯生物治疗公司，
类型：发明
国别省市：
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