一种重组杆状病毒表达载体的构建方法及其产品和应用技术

本发明专利技术公开了一种重组杆状病毒表达载体的构建方法及其产品和应用，所述构建方法包括以下步骤：将核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的重组质粒pBD‑eGFP转化至DH10B(ac55‑61‑ko，h)感受态细胞中，筛选，培养，待长出蓝白斑后，挑取白色单菌落，扩摇，获得重组杆状病毒表达载体。本发明专利技术在野生型AcMNPV基础上通过λ‑Red同源重组技术缺失了AcMNPV中ac55‑61这一段非必需基因，借助bac‑to‑bac系统，将eGFP基因转座至改造后的缺陷型和野生型杆状病毒上，成功构建了重组病毒质粒，转染Sf9细胞，得到重组病毒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种重组杆状病毒表达载体的构建方法及其产品和应用，属于病毒领域。

技术介绍

1、杆状病毒表达系统常被用于蛋白质生产和哺乳动物细胞中基因递送，bac-to-bac表达系统是常用的杆状病毒表达系统，该系统常用于药物开发、疫苗、免疫活性分子研究等多个领域。bac-to-bac系统是指从细菌(bacterium)直到产生杆状病毒(baculovirus)的一个完整的生产系统，主要由供体质粒(donor)、辅助质粒(helper)、杆状病毒质粒(bacmid)以及改造好的大肠杆菌dh10b组成。供体质粒在mini-tn7左右同源臂(tn7l和tn7r)之间构建有一个完整的表达框，可将外源基因插入启动子后的多克隆位点上。辅助质粒能编码转座酶参与tn7转座，帮助外源基因插入bacmid。bacmid中含有经过改造的acmnpv完整基因组、mini-f复制子和mini-att tn7靶位点。mini-f复制子能保证bacmid在大肠杆菌中正常复制，mini-atttn7靶位点提供转座整合位点。当供体质粒转化进含helper和bacmid的大肠杆菌dh10b中本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种构建重组菌DH10B(ac55-61-ko，h)的方法，其特征在于，包括以下步骤：将核苷酸如SEQ ID NO.1所示的序列转化至含有pKD46质粒、AcBacmid的BW25113感受态细胞，筛选，扩摇后，提取Bacmid，转化，筛选得到所述重组菌DH10B(ac55-61-ko，h)。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述如SEQ ID NO.1所示的序列是以pKD3为模板，PCR扩增缺失ac55-61的同源片段55R-cat-61F后得到的。

3.一株由权利要求1所述方法构建的重组菌DH10B(ac55-61-ko，h)。

4.一...

【技术特征摘要】

1.一种构建重组菌dh10b(ac55-61-ko，h)的方法，其特征在于，包括以下步骤：将核苷酸如seq id no.1所示的序列转化至含有pkd46质粒、acbacmid的bw25113感受态细胞，筛选，扩摇后，提取bacmid，转化，筛选得到所述重组菌dh10b(ac55-61-ko，h)。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述如seq id no.1所示的序列是以pkd3为模板，pcr扩增缺失ac55-61的同源片段55r-cat-61f后得到的。

3.一株由权利要求1所述方法构建的重组菌dh10b(ac55-61-ko，h)。

4.一种构建重组杆状病毒表达载体的方法，其特征在于，包括以下步骤：将核苷酸序列如seq id no.2所示的重组质粒pbd-egfp转化至dh10b(ac55-61-ko，h)感受态细胞中，涂布于抗性lb固体培养基，倒置培养，待长出蓝白斑...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁昌镛，卢会星，赵淑玲，刘明明，吕加庆，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：