【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及提高细胞表达系统中生物分子产量的技术。特别地，描述了一种将重组蛋白从工程细胞输出到诱导的细胞外囊泡中的系统。
技术介绍
1、大肠杆菌(e.coli)在学术和工业规模上都是具有吸引力的重组蛋白生产系统(jan,a.t.(2017)front.microbiol.8,7692–11；gerritzen,m.j.h.等人(2017)biotechnology advances 35,565–574)。它不仅便宜且易于批量培养至高密度，而且本领域还开发了多种菌株、试剂、启动子和工具，以促进大肠杆菌中功能蛋白的生产。合成生物学策略的应用现在正在克服通常与翻译后修饰的应用和复合蛋白的正确折叠相关的限制(kim,j.h.等人(2015)semin.cell dev.biol.40,97–104)。对于所有表达系统，始终需要提高蛋白质产量和提高蛋白质纯化效率。
2、革兰氏阴性细菌产生外膜囊泡(omv)以促进细胞外通讯和相互作用(例如群体感应)。omv是从外膜释放的小球形脂质双层(直径为约100nm)。详细的质谱和色谱分析已经确...
【技术保护点】
1.一种分离的囊泡成核多肽(VNp)，其包含衍生自突触核蛋白同种型及其变体的氨基末端的两亲性α-螺旋多肽。
2.根据权利要求1所述的分离的囊泡成核多肽，其中所述多肽具有9至140个氨基酸、优选16至40个氨基酸、更优选约20个氨基酸。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的分离的囊泡成核多肽，其中序列是SEQ ID NO:2至SEQ ID NO:28中的任一者。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的囊泡成核多肽，其中所述多肽在其氨基末端被乙酰化。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的分离的囊泡成核多肽，其中所述多肽还...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种分离的囊泡成核多肽(vnp)，其包含衍生自突触核蛋白同种型及其变体的氨基末端的两亲性α-螺旋多肽。
2.根据权利要求1所述的分离的囊泡成核多肽，其中所述多肽具有9至140个氨基酸、优选16至40个氨基酸、更优选约20个氨基酸。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的分离的囊泡成核多肽，其中序列是seq id no:2至seq id no:28中的任一者。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的囊泡成核多肽，其中所述多肽在其氨基末端被乙酰化。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的分离的囊泡成核多肽，其中所述多肽还包含亮氨酸拉链序列。
6.根据权利要求5所述的分离的囊泡成核多肽，其中所述亮氨酸拉链序列具有seq idno:29的序列。
7.根据权利要求5或权利要求6所述的分离的囊泡成核多肽，其中所述亮氨酸拉链序列位于所述多肽的羧基末端。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的分离的囊泡成核多肽，其中所述多肽还包含蛋白酶切割位点。
9.一种融合蛋白，其包含与生物分子的氨基末端融合的如权利要求1至8中任一项所述的囊泡成核多肽。
10.根据权利要求9所述的融合蛋白，其中所述囊泡成核多肽通过蛋白酶切割位点与所述生物分子的所述氨基末端融合。
11.根据权利要求10所述的融合蛋白，其中所述蛋白酶切割位点用于病毒蛋白酶或病毒3c样蛋白酶。
12.根据权利要求10或权利要求11所述的融合蛋白，其中所述蛋白酶切割位点是无痕的。
13.根据权利要求10至12中任一项所述的融合蛋白，其中所述蛋白酶切割位点对一种或以上膜结合蛋白酶或胞质蛋白酶具有特异性。
14.根据权利要求9至13中任一项所述的融合蛋白，其中在表达所述融合蛋白的表达系统中，所述生物分子未组成性表达至可检测水平。
15.根据权利要求14所述的融合蛋白，其中所述生物分子是膜结合蛋白、不溶性蛋白或通常对表达所述融合蛋白的宿主细胞有毒的蛋白。
16.根据权利要求9至15中任一项所述的融合蛋白，其中所述生物分子的大小在小于1kda至100kda的范围内。
17.一种核苷酸序列或载体，其表达根据权利要求9至16中任一项所述的融合蛋白。
18.一种宿主细胞，其表达根据权利要求9至16中任一项所述的融合蛋白或包含根据权利要求17所述的核苷酸序列或载体。
19.根据权利要求18所述的宿主细胞，其中所述细胞是原核细胞、单细胞真核生物或培养的真核细胞系。
20.根据权利要求19所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是大肠杆菌。
21.根据权利要求18至20中任一项所述的宿...
【专利技术属性】
技术研发人员：丹尼尔·马尔维希尔，卡伦·贝克，塔拉·伊斯特伍德，克里斯托夫·伦农，
申请(专利权)人：肯特大学，
类型：发明
国别省市：
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