一种大鼠前列腺上皮细胞培养方法技术

本发明专利技术提供了一种大鼠前列腺上皮细胞培养方法，包括：步骤S1，摘取大鼠的前列腺；步骤S2，将所述前列腺放于已灭菌的铡刀上；步骤S3，于50mL离心管中加入300 U/mL的I型胶原酶20 mL；步骤S4，配制300 U/mL的I型胶原酶+300 U/mL的IV型胶原酶20mL；步骤S5，将胶原酶上清液吸出；步骤S6，将离心后的沉淀细胞用5mL DMEM培养基终止、重悬；步骤S7，重复五次所述步骤S6；步骤S8，将5次提取的细胞置于37℃的5%CO2培养箱中培养；步骤S9，鉴定大鼠前列腺上皮细胞；步骤S10，以0.2mL/孔的容量，将细胞均匀接种到3个96孔板内，每孔细胞数量104个。向DMEM培养基中添加5x10‑5 g/L霍乱毒素、5x10‑3g/L胰岛素、4x10‑5g/L表皮生长因子、5x10‑4g/L地塞米松磷酸钠时，促进大鼠前列腺上皮细胞增殖的能力最强。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞培养，具体而言，涉及一种大鼠前列腺上皮细胞培养方法。

技术介绍

1、目前，市售的商品化前列腺上皮细胞培养基成分复杂、导致培养条件不可控，且实验成本过高。

技术实现思路

1、本专利技术提供了一种大鼠前列腺上皮细胞培养方法，所述方法包括：步骤s1，摘取大鼠的前列腺，去除其上的脂肪、血管及被膜组织，放入2ml已加入2%双抗溶液40μl的pbs缓冲液中，再移至细胞间；步骤s2，将所述前列腺放于已灭菌的铡刀上，用挤压块反复在所述铡刀上挤压；步骤s3，于50ml离心管中加入300 u/ml的i型胶原酶20 ml，加入2%的双抗溶液（v/v） 400μl，将所述铡刀上的组织块移至离心管内，于37℃的水浴锅中消化；步骤s4，当镜下观察有游离细胞或者细胞团时，静置5min，吸取上层液体，保留下层分泌单元组织，配制300 u/ml的i型胶原酶+300 u/ml的iv型胶原酶20ml，加入2%的双抗溶液400μl，于37℃水浴锅中消化约18至22min；步骤s5，当镜下观察有游离细胞或者细胞团时，静置5min，小本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种大鼠前列腺上皮细胞培养方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的一种大鼠前列腺上皮细胞培养方法，其特征在于，所述培养基以DMEM或1640作为基础培养基。

3.根据权利要求2所述的一种大鼠前列腺上皮细胞培养方法，其特征在于，所述培养基包括霍乱毒素、胰岛素、表皮生长因子、地塞米松磷酸钠，所述霍乱毒素的含量为2.5*10-4或5*10-5或10-5或2*10-6 g/L，所述胰岛素的含量为10-2或5*10-3或2.5*10-3或2.5*10-3g/L，所述表皮生长因子的含量为4*10-5或2*10-5或10-5或5*10-6 g/L，所述地塞...

【技术特征摘要】

1.一种大鼠前列腺上皮细胞培养方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的一种大鼠前列腺上皮细胞培养方法，其特征在于，所述培养基以dmem或1640作为基础培养基。

3.根据权利要求2所述的一种大鼠前列腺上皮细胞培养方法，其特征在于，所述培养基包括霍乱毒素、胰岛素、表皮生长因子、地塞米松磷酸钠，所述霍乱毒素的含量为2.5*10-4或5*10-5或10-5或2*10-6 g/l，所述胰岛素的含量为10-2或5*10-3或2.5*10-3或2.5*10-3g/l，所述表皮生长因子的含量为4*10-5或2*10-5或10-5或5*10-6 g/l，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱鹏，尚禹东，武栋，郑琳琳，谢桦函，
申请(专利权)人：珠海中科先进技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：