一种牛呼吸道合胞体病毒RPA-LFD快速检测引物组、试剂盒及测序文库制造技术

本申请涉及生物病毒检测技术领域，具体涉及一种牛呼吸道合胞体病毒RPA‑LFD快速检测引物组及其试剂盒。本申请根据GenBank中牛呼吸道合胞体病毒N基因序列，设计3对特异性引物，且5'端分别用FAM和Biotin标记的引物，将扩增出基因片段，克隆到pMD‑18T载体上，构建N基因阳性标准品。通过对RPA和LFD反应条件的优化，并进行敏感性、特异性、重复性检测，建立牛呼吸道合胞体病毒RPA‑LFD诊断方法，并以此研制出诊断试剂盒。结果显示试剂盒对牛呼吸道合胞体病毒检测灵敏度达15ng/μL，与现有的PCR技术进行比较，结果可通过肉眼判断检测结果，30分钟检测完成，且不需要大型设备，非常适合养殖场肉牛现场检测，具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及生物病毒检测，具体涉及一种牛呼吸道合胞体病毒rpa-lfd快速检测引物组、试剂盒及测序文库。

技术介绍

1、牛呼吸道合胞体病是由牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncyticalvirus，brsv)引起的一种急性、热性呼吸道传染病，牛、绵羊、山羊及其他动物易感，多数为无症状感染，其他种属感染后可能会增加牛感染brsv的风险，且集约化养殖的刚断奶犊牛及青年牛可感染发病导致肺炎、间质性肺水肿及肺气肿。奶牛出现泌乳量显著下降，妊娠母牛则会导致流产、公牛精子质量下降等，当与其他病原发生混合感染或继发感染，病死率急剧升高。资料表明在欧盟许多国家该病被列为仅次于牛病毒性腹泻及牛传染性鼻气管炎的三大重要牛病之一。我国2007年首次分离到brsv，随后在全国各地均有检测到病毒抗体的报道。统计显示，因感染呼吸道疫病，美国平均每年损失大约10亿美元，给养牛业造成严重的经济损失。

2、目前，brsv实验室诊断包括病毒分离鉴定、血清学诊断和分子生物学诊断。传统的分离培养诊断方法确诊时间长；血清学诊断主要检测brsv抗原或抗体，包本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种牛呼吸道合胞体病毒RPA-LFD快速检测引物组，其特征在于，包含下列引物中的任意一对或多对：

2.根据权利要求1所述的牛呼吸道合胞体病毒RPA-LFD快速检测引物组，其特征在于，含有引物中的N3：

3.权利要求1所述的牛呼吸道合胞体病毒RPA-LFD快速检测引物组在制备牛呼吸道合胞体病毒检测试剂方面的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述牛呼吸道合胞体病毒检测试剂，是牛呼吸道合胞体病毒RPA-LFD快速检测试剂盒。

5.一种牛呼吸道合胞体病毒RPA-LFD快速检测试剂盒，其特征在于，含有下列引物中的任意一对或多对：<...

【技术特征摘要】

1.一种牛呼吸道合胞体病毒rpa-lfd快速检测引物组，其特征在于，包含下列引物中的任意一对或多对：

2.根据权利要求1所述的牛呼吸道合胞体病毒rpa-lfd快速检测引物组，其特征在于，含有引物中的n3：

3.权利要求1所述的牛呼吸道合胞体病毒rpa-lfd快速检测引物组在制备牛呼吸道合胞体病毒检测试剂方面的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述牛呼吸道合胞体病毒检测试剂，是牛呼吸道合胞体病毒rpa-lfd快速检测试剂盒。

5.一种牛呼吸道合胞体病毒rpa-lfd快速检测试剂盒，其特征在于，含有下列引物中的任意一对或多对：

6.根据权利要求5所述的牛呼吸道合胞体病毒rpa-lfd快速检测试剂盒，其特征在于，含有引物中的n3：

7.根据权利要求5所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜玲玲，余波，任荣清，罗文菊，周景瑞，许浩翔，
申请(专利权)人：贵州省畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：