用于核纤层蛋白A相关缺陷的基因疗法制造技术

本文提供了一种重组AAV(rAAV)，其包括AAV衣壳和包装在其中的载体基因组，其中所述载体基因组包括AAV 5'反向末端重复序列(ITR)、表达盒和AAV 3'ITR，所述表达盒包括在引导成熟hLaminA在靶细胞中表达的调节序列的控制下的成熟人核纤层蛋白A(hLaminA)的开放阅读框(ORF)。还提供了一种包括于调配物缓冲液中的如本文所述的rAAV的药物组合物，以及一种治疗特发性扩张型心肌病(DCM)或与核纤层蛋白A(LMNA)基因中的突变相关的疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

技术介绍

1、特发性扩张型心肌病(dcm)的患病率估计为1:500(hershberger,r.、hedges,d.和morales,a.扩张型心肌病：多样化基因结构的复杂性(dilated cardiomyopathy:thecomplexity of a diverse genetic architecture.)《自然评论：心脏病学(nat revcardiol)》10,531-547(2013))。据估计，dcm的约40％的遗传原因源于少于3个基因的罕见变异，所述变异进而影响各种蛋白质的功能，其中基因是核纤层蛋白a基因(lmna)。特发性dcm中核纤层蛋白a基因(lmna)的突变的估计患病率是无关dcm先证者的5.9％(19/324)(美国)(parks sb、kushner jd、nauman d等人患有特发性或家族性扩张型心肌病的324名无关患者群组的核纤层蛋白a/c突变分析(lamin a/c mutation analysis in a cohort of324unrelated patients with idiopathic or f本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种重组腺相关病毒(rAAV)，其包括腺相关病毒(AAV)衣壳和包装在所述AAV衣壳中的载体基因组，其中所述载体基因组包括AAV 5'反向末端重复序列(ITR)、表达盒和AAV 3'ITR，其中所述表达盒包括成熟人核纤层蛋白A(hLaminA)编码序列的工程化开放阅读框(ORF)，所述编码序列编码缺乏前蛋白羧基(C)末端尾部的成熟hLaminA，其中所述ORF与引导所述成熟hLaminA蛋白在细胞中表达的调节控制序列可操作地连接，并且其中所述调节控制序列包括启动子、任选地增强子和聚腺苷酸化(polyA)序列。

2.根据权利要求1所述的rAAV，其中所述工程化ORF包括具有...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种重组腺相关病毒(raav)，其包括腺相关病毒(aav)衣壳和包装在所述aav衣壳中的载体基因组，其中所述载体基因组包括aav 5'反向末端重复序列(itr)、表达盒和aav 3'itr，其中所述表达盒包括成熟人核纤层蛋白a(hlamina)编码序列的工程化开放阅读框(orf)，所述编码序列编码缺乏前蛋白羧基(c)末端尾部的成熟hlamina，其中所述orf与引导所述成熟hlamina蛋白在细胞中表达的调节控制序列可操作地连接，并且其中所述调节控制序列包括启动子、任选地增强子和聚腺苷酸化(polya)序列。

2.根据权利要求1所述的raav，其中所述工程化orf包括具有seq id no:4的核酸序列或与seq id no:4至少90％相同的编码缺乏所述前蛋白羧基(c)末端尾部的成熟hlamina的核酸序列的编码序列。

3.根据权利要求1或2所述的raav，其中所述成熟hlamina具有seq id no:5的氨基酸序列。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的raav，其中所述成熟hlamina编码序列包括seqid no:4的核酸序列。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的raav，其中所述调节控制序列包括作为心脏启动子的启动子。

6.根据权利要求5所述的raav，其中所述心脏启动子是心肌肌钙蛋白t(ctnt)启动子。

7.根据权利要求6所述的raav，其中所述ctnt启动子是鸡ctnt启动子。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的raav，其中所述调节控制序列包括杂合心脏启动子，所述杂合心脏启动子包括巨细胞病毒即刻早期(cmvie)增强子、间隔子序列和鸡ctnt启动子。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的raav，其中所述调节控制序列包括作为兔β-珠蛋白(rbg)polya序列的polya序列。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的raav，其中所述调节控制序列进一步包括突变的wpre元件。

11.根据权利要求1至9中任一项所述的raav，其中所述表达盒包括杂合心脏启动子，所述杂合心脏启动子包括cmv ie增强子、间隔子序列和鸡ctnt启动子，其中所述杂合启动子与seq id no:4的所述hlamina编码序列可操作地连接，并且所述表达盒进一步包括rbgpolya序列。

12.根据权利要求11所述的raav，其中所述表达盒包括seq id no:2的核酸序列或与seq id no:2至少90％相同的核酸序列。

13.根据权利要求1至9或11至12中任一项所述的raav，其中所述载体基因组包括seqid no:1(cmv-ie.chtntp.lamina.rbg)的核酸序列。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的raav，其中所述aav衣壳是进化枝faav。

15.根据权利要求1至13中任一项所述的raav，其中所述aav衣壳是aavhu68。

16.根据权利要求1至13中任一项所述的raav，其中所述aav衣壳是aavhu95。

17.根据权利要求1至13中任一项所述的raav，其中所述aav衣壳是aavhu96。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的raav，其用于治疗特发性扩张型心肌病(dcm)或与核纤层蛋白a(lmna)基因中的突变相关的疾病。

19.根据权利要求18所述的raav，其中所述疾病与lmna基因中的突变相关，选自肌营养不良、神经病、脂肪营养不良、节段性早衰。

20.根据权利要求19所述的raav，其中与功能失调lmna基因相关的疾病进一步选自埃默里-德赖弗斯肌营养不良(emery-dreifuss muscular dystrophy，edmd)、马鲁夫综合征(malouf syndrome，mlf)、先天性肌营养不良(mdc)、肢带型肌营养不良1b型(lgmd1b)、夏科-马里-图思病2b1型(charcot-marie-tooth disease type 2b1，cmt2b1)、轴索神经病、家族性部分脂肪营养不良2型(fpld2)、下颌骨发育不良脂肪营养不良(mad)、下颌骨发育不良a型(mada)、非典型沃纳综合征(atypicalwerner syndrome，aws)、过早衰老综合征(早衰)以及哈钦森-吉尔福德早衰综合征(hutchinson-gilford progeria syndrome，hgps)。

21.一种组合物，其包括根据权利要求1至20中任一项所述的raav的原液和水性悬浮液介质。

22.根据权利要求21所述的组合物，其中所述悬浮液被调配成用于静脉内(iv)注射。

23.一种药物组合物，其包括于调配物缓冲液中的根据权利要求1至20中任一项所述的raav。

24.根据权利要求23所述的药物组合物，其被调配成用于通过静脉内(iv)注射来递送。

25.根据权利要求24所述的药物组合物，其被调配成具有约6.5至约7.5的ph。

26.根据权利要求24或25所述的药物组合物，其被调配成具有约6.8...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·欣德尔，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚州大学信托人，
类型：发明
国别省市：