一种RNA亲和纯化测序方法技术

本申请公开了一种RNA亲和纯化测序方法，属于基因测序技术领域。本申请提供的方法是在生物体外，表达纯化出RNA结合蛋白，再与RNA进行结合，然后对结合的RNA进行建库和测序。相对于RIP‑seq和CLIP‑seq，第一，本申请的体外实验更加稳定，可控，灵活，通量高；第二，本申请无需固定交联，减少有毒试剂危害；第三，本申请无需RNA结合蛋白特异性的抗体，更加具有普适性；第四，本申请特异性筛选与RNA结合蛋白的mRNA、lncRNA和circRNA。

【技术实现步骤摘要】

本申请属于基因测序，尤其涉及一种rna亲和纯化测序方法。

技术介绍

1、rna结合蛋白(rna-binding protein,rbp)是具有一类或多个rna结合域的蛋白，这类蛋白质通过和rna的结合来改变rna结构、表达效率和功能。目前rna与蛋白质相互作用的研究技术主要有rip-seq和clip-seq等。rip-seq和clip-seq需要进行体内实验，使用有毒试剂进行固定，成功率低，对人体有害，通量低，且需要特异性抗体来满足实验需求，限制了技术的普适性。且上述技术实验还存在周期长，重复性差，对抗体的要求高，无法特异进行rna互作研究等问题，给这些技术的实际应用带来了诸多不便。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，本申请提供了一种安全性更高、体外、高通量、普适性更高的rna亲和纯化测序方法。

2、为了实现上述专利技术目的，本申请提供以下技术方案：

3、本申请提供了一种rna亲和纯化测序方法，包括如下步骤：

4、(1)提取目标样本的总rna；>

5、(2)对本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种RNA亲和纯化测序方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种RNA亲和纯化测序方法，其特征在于，步骤(2)中，所述收集mRNA、lncRNA和circRNA采用探针进行。

3.根据权利要求1所述的一种RNA亲和纯化测序方法，其特征在于，步骤(3)包括：

4.根据权利要求3所述的一种RNA亲和纯化测序方法，其特征在于，步骤S2中，所述RNA结合蛋白的编码基因的CDS序列如SEQ ID No.1所示；

5.根据权利要求3所述的一种RNA亲和纯化测序方法，其特征在于，步骤S4中，所述蛋白表达载体的初始表达载体为pT7s...

【技术特征摘要】

1.一种rna亲和纯化测序方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种rna亲和纯化测序方法，其特征在于，步骤(2)中，所述收集mrna、lncrna和circrna采用探针进行。

3.根据权利要求1所述的一种rna亲和纯化测序方法，其特征在于，步骤(3)包括：

4.根据权利要求3所述的一种rna亲和纯化测序方法，其特征在于，步骤s2中，所述rna结合蛋白的编码基因的cds序列如seq id no.1所示；

5.根据权利要求3所述的一种rna亲和纯化测序方法，其特征在于，步骤s4中，所述蛋白表达载体的初始表达载体为pt7sp6；

6.根据权利要求1所述的一种rna亲和纯化测序方法，其特征在于，步骤(4)中，所述体外蛋白表达的试剂包括：28～32μl的tnt mix，0.8～1.2μl的rn...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁杉，赵瑞，齐硕，王海鑫，
申请(专利权)人：蓝景科信河北生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：