干扰苹果蠹蛾RNA核酸降解酶基因的dsRNA及其合成方法与应用技术

本发明专利技术涉及分子生物学技术领域，尤其涉及干扰苹果蠹蛾RNA核酸降解酶基因的dsRNA及其合成方法与应用，dsRNA采用核酸降解酶基因CPOM02657或CPOM13335合成，所述基因CPOM02657的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述基因CPOM13335的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。上述核酸降解酶dsRNA可以应用于苹果蠹蛾分子靶标基因功能验证及其分子靶标防治，应用方法为双次注射dsRNA，所述双次注射dsRNA包括：第一次注射dsCPOM02657或dsCPOM13335后，在距离第一次注射的3～6h内，进行第二次注射目的基因dsRNA。本发明专利技术基于RNAi技术先注射核酸降解酶基因dsCPOM02657或dsCPOM13335沉默核酸降解酶基因表达，再而注射目的基因dsRNA，提高目的基因表达沉默效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学，尤其涉及干扰苹果蠹蛾rna核酸降解酶基因的dsrna及其合成方法与应用。

技术介绍

1、苹果蠹蛾是我国的重要入侵害虫和重点管控的检疫对象，在我国的分布范围占据9个省、204个县(区、市)，且有向南快速扩散的趋势，这将对我国两个优势苹果产区渤海湾产区和西北黄土高原产区形成东西夹击之势，严重危害我国苹果和梨等仁果类水果的生产和出口。苹果蠹蛾目前主要的防治措施包括：(1)化学防治(化学农药)，(2)生物防治(苹果蠹蛾颗粒体病毒)。然而，化学农药制剂和生防制剂的长期滥用和过度使用导致苹果蠹蛾对两种防治措施中使用的药剂产生严重的抗药性，防治效果严重下降。

2、rnainterference(rna干扰)途径是一种天然的抗病毒免疫系统。病毒dsrna被识别为病原体相关的分子模式，经dicer酶加工成sirna，sirna进入后续的rnai途径，与ago基因结合形成rna-inducedsilencing(risc)复合体，并进一步特异性靶向目标基因，产生基因沉默作用。许多研究已经证明rnai技术可以通过dsrna喷洒或喂食或通过转本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.干扰苹果蠹蛾RNA核酸降解酶基因的dsRNA，其特征在于，所述dsRNA采用核酸降解酶基因CPOM02657或CPOM13335合成，所述基因CPOM02657的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示，所述基因CPOM13335的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.干扰苹果蠹蛾RNA核酸降解酶基因的dsRNA的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的干扰苹果蠹蛾RNA核酸降解酶基因的dsRNA的合成方法，其特征在于，所述基因CPOM02657的克隆扩增引物包括正向引物CPOM02657-F_PCR和反向引物CPOM02657-R_...

【技术特征摘要】

1.干扰苹果蠹蛾rna核酸降解酶基因的dsrna，其特征在于，所述dsrna采用核酸降解酶基因cpom02657或cpom13335合成，所述基因cpom02657的核苷酸序列如seq idno.1所示，所述基因cpom13335的核苷酸序列如seq id no.2所示。

2.干扰苹果蠹蛾rna核酸降解酶基因的dsrna的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的干扰苹果蠹蛾rna核酸降解酶基因的dsrna的合成方法，其特征在于，所述基因cpom02657的克隆扩增引物包括正向引物cpom02657-f_pcr和反向引物cpom02657-r_pcr，所述cpom02657-f_pcr的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述cpom02657-r_pcr的核苷酸序列如seq id no.4所示；

4.根据权利要求3所述的干扰苹果蠹蛾rna核酸降解酶基因的dsrna的合成方法，其特征在于，所述s1步骤中合成dsrna的扩...

【专利技术属性】
技术研发人员：李再园，刘博，乔曦，万方浩，钱万强，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业基因组研究所，
类型：发明
国别省市：