【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于定量来自样品的靶核酸的组合物、试剂盒和方法。特别地，本文所述的实施方案使得能够在与靶核酸序列相同的反应体积内使用内部定量标准物(iqs)来定量靶核酸。
技术介绍
1、检测感兴趣的靶核酸序列的测定广泛用于分子生物学和医学，特别是聚合酶链式反应(pcr)过程。临床应用通常涉及从受试者收集样品，提取核酸，并且在靶标特异性引物的存在下使提取的样品经受扩增条件。因此，扩增产物的存在表明靶核酸存在于样品中，而未能测量到扩增产物则表明靶核酸不存在或以对于检测而言太低的水平存在。因此，此类测定可用于检测和监测病原性疾病，以及其他应用(诸如环境样品的分析)。
2、标准定量聚合酶链式反应(qpcr)过程通过监测与靶序列的扩增相关的靶标特异性荧光信号来测量靶dna的扩增。输出是定量循环(cq)值，其指示对应于靶序列的荧光信号超过背景荧光阈值水平的pcr循环数。cq值与样品中的靶核酸的量成反比。即，较低的cq值表示较高量的靶核酸，而较高的cq值表示较低量的靶核酸(或pcr过程的问题)。然而，cq值不直接指示样品中靶核酸的实际浓度。
3、有本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于定量测试样品中的靶核酸的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶核酸是病毒核酸。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述靶核酸是SARS-CoV-2核酸。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述靶标特异性引物对SARS-CoV-2的Orf1a基因、Orf1b基因、N基因或S基因中的一者或多者的至少一部分有特异性。
5.根据权利要求2所述的方法，其中所述靶核酸来自人免疫缺陷病毒(HIV)。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述靶标特异性引物对HIV的gag区域、LTR区域、整...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于定量测试样品中的靶核酸的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶核酸是病毒核酸。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述靶核酸是sars-cov-2核酸。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述靶标特异性引物对sars-cov-2的orf1a基因、orf1b基因、n基因或s基因中的一者或多者的至少一部分有特异性。
5.根据权利要求2所述的方法，其中所述靶核酸来自人免疫缺陷病毒(hiv)。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述靶标特异性引物对hiv的gag区域、ltr区域、整合酶区域或pol区域中的一者或多者的至少一部分有特异性。
7.根据权利要求1的所述方法，其中所述iqs是外源核酸。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述iqs是合成核酸。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶标特异性引物和所述iqs特异性引物不同，使得所述靶核酸的扩增与所述iqs的扩增是非竞争性的。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶标特异性引物中的至少一个靶标特异性引物与所述iqs特异性引物中的至少一个iqs特异性引物相同。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述靶标特异性引物和所述iqs特异性引物是相同的。
12.根据权利要求10所述的方法，还包括使用被配置为与所述靶核酸的扩增子相关的靶标特异性探针和被配置为与所述iqs的扩增子相关的iqs特异性探针，其中所述靶标特异性探针和所述iqs特异性探针是不同的。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述靶标特异性探针和所述iqs特异性探针具有不同的序列。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述靶标特异性探针和所述iqs特异性探针具有共享约1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个或30个碱基的重叠序列区域。
15.根据权利要求12所述的方法，其中所述靶标特异性探针和所述iqs特异性探针具有不同的染料标记。
16.根据权利要求1所述的方法，其中扩增所述靶核酸的至少一部分的步骤包括逆转录反应。
17.根据权利要求1所述的方法，其中扩增所述iqs的至少一部分的步骤包括逆转录反应。
18.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(c)和步骤(d)的所述扩增同时进行。
19.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法在不使用标准曲线来确定所述测试样品中的所述靶核酸的所述量的情况下进行。
20.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法在不使用被动参考对照染料的情况下进行。
21.根据权利要求1所述的方法，其中所述rq值被确定为：
22.根据权利要求1所述的方法，其中所述rq值被确定为：
23.根据权利要求1所述的方法，其中所述校正因子通过以下步骤确定：
24.根据权利要求23所述的方法，其中通过测量多个已知浓度下所述靶标和iqs的多个cq值来确定所述校正因子。
25.根据权利要求24所述的方法，其中通过对所述多个已知浓度的所述cq值比率求平均值来确定所述校正因子。
26.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶核酸的所述量(靶标量)通过下式确定：
27.根据权利要求1所述的方法，还包括从原始样品中提取所述靶核酸以形成所述测试样品。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述iqs在所述提取之前添加到所述原始样品。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述iqs是装甲的。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述iqs是装甲的，任选地其中所述iqs是使用ms2外壳蛋白装甲的并且/或者是具有噬菌体ms2载体作为装甲rna的哺乳动物rna病毒载体。
31.根据权利要求1所述的方法，还包括：
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述内源核酸是核糖核酸酶p(rnasep)，并且其中所述内源序列引物对rnasep有特异性。
33.根据权利要求31所述的方法，还包括：
【专利技术属性】
技术研发人员：S·L·孔，S·M·刘，A·英，M·R·富尔塔多，G·Y·H·王，D·肯尼，J·H·Y·潘，X·徐，
申请(专利权)人：生命科技公司，
类型：发明
国别省市：
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