穿孔素的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，公开了一种制备穿孔素的方法，其特征在于，所述方法包括：培养重组宿主细胞，在诱导剂存在下进行诱导表达，然后收集重组宿主细胞培养基；其中，所述重组宿主细胞为通过重组载体导入有穿孔素基因的大肠杆菌(Escherichia coli)；所述诱导表达的温度为12‑20℃；所述重组载体为PET28a(+)。本发明专利技术所述方法能获得有活性的穿孔素，而且穿孔素的表达时间短、浓度高、活性高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种穿孔素的制备方法及其应用。

技术介绍

1、噬菌体主要通过穿孔素-裂解酶系统裂解细菌。穿孔素是噬菌体在感染宿主菌后期合成的小分子量疏水性跨膜蛋白，能够以寡聚体形式聚集于细胞膜上形成稳定的跨膜通道，造成细胞膜损伤。

2、由于存在细胞毒性、溶解度低、抑制表达菌株生长等特点，穿孔素的克隆和表达困难重重。而且穿孔素分子量小，一般10kda左右，即使成功表达活性也低。目前的方法都是在37℃条件下，通过普通感受态大肠杆菌，只能获得少量表达的穿孔素，而且所得穿孔素的活性低，纯化后浓度低，难以继续进一步研究。

3、目前，抗生素的滥用给耐药细菌感染的治疗带来了极大的挑战。噬菌体作为抗生素替代品近年来备受关注，但是由于大多数噬菌体特异性强，宿主谱窄，在临床上的应用受到限制。而噬菌体编码的穿孔素存在良好的抑菌潜力，是具有强杀菌活性的新型酶，具有无内毒素、高效抑菌、不易产生耐药性等特点，有望开发成抗菌制剂应用于耐药菌的防治，为抗临床耐药细菌提供新的方法和思路。

技术实现思路

<本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种制备穿孔素的方法，其特征在于，所述方法包括：培养重组宿主细胞，在诱导剂存在下进行诱导表达，然后收集重组宿主细胞培养基；

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述培养的条件包括：温度为36-39℃，pH为6-8；

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，每107CFU宿主细胞，所述重组载体的用量为1-2μg；

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中，所述穿孔素为鲍曼不动杆菌噬菌体的穿孔素；

5.一种非治疗目的抑制细菌活性的方法，其特征在于，所述方法包括按照权利要求1-4中任意一项所述的方法制备穿孔素，然后使所述穿孔素与细菌接...

【技术特征摘要】

1.一种制备穿孔素的方法，其特征在于，所述方法包括：培养重组宿主细胞，在诱导剂存在下进行诱导表达，然后收集重组宿主细胞培养基；

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述培养的条件包括：温度为36-39℃，ph为6-8；

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，每107cfu宿主细胞，所述重组载体的用量为1-2μg；

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中，所述穿孔素为鲍曼不动杆菌噬菌体的穿孔素；

5.一种非治疗目的抑制细菌活性的方法，其特征在于，所述方法包括按照权利要求1-4中任意一项所述的方法制备穿孔素，然后使...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴敏乐，郭玮，王蓓丽，潘柏申，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：