【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医疗检测，具体涉及一种全自动液态悬浮芯片检测方法。
技术介绍
1、液态悬浮芯片检测是一种综合了分子生物学、免疫学、高分子化学、光学检测技术、微流体技术以及计算机技术等多个领域的高通量多参数检测技术。这一技术与传统流式细胞仪相比，具有高通量、多指标检测、高敏感性、高特异性、宽线性范围、反应迅速、重复性好以及操作简便等优点。因此，它已经广泛应用于免疫学分析、dna杂交分析、以及蛋白质和基因表达谱的分子检测等领域的临床诊断。
2、传统的悬浮式液态生物芯片所采用的流式点阵法是将磁珠依次流经鞘流池，通过红激光进行分类，绿激光进行报告值激发，apd/pmt进行数据的采集，从而实现多重项目的检测，具有对安装调试对人员要求高，液路复杂，故障率高，维护保养不便，成本高等特点。因此，实际应用中迫切需要一种特异性灵敏度高、成本低、自动化程度高且操作简单的悬浮式液态生物芯片检测方法。
技术实现思路
1、为了实现高效准确的实现液态悬浮芯片检测，本专利技术提供了一种全自动液态悬浮芯片检测方法。
2、本专利技术采用的技术方案如下：一种全自动液态悬浮芯片检测方法，步骤如下：
3、步骤一，吸样：自动吸取预设体积和位置信息的待测样本；
4、步骤二，样本处理：按照预定顺序，对待测样本进行处理，使样本和试剂中的磁珠抗体相结果，并通过sape放大荧光信号；
5、步骤三，二次吸样：将处理完成的样本引入后续处理分析环节；
6、步骤四，固定磁珠
7、步骤五，采集照片信息：点亮红光，激发磁珠生成一束红光、一束红外光，相机分别与红光滤波片、红外滤波片配合，采集微珠生成的红光照片与红外光照片；点亮绿光，相机与报告值滤波片配合，采集微珠的报告值照片；
8、步骤六，图片处理：对红光照片与红外光照片，输出灰度图片；
9、步骤七，确定微球群对应项目：根据灰度图片的进行计算红光和红外光的灰度值，由红光和红外光的灰度值形成微球的种类分布图，获取微球群所对应的项目；
10、步骤八，确定报告灰度值：根据报告值照片，计算每个点的报告值灰度，采用中位数的方法得到每个项目微球群的报告灰度值；
11、步骤九，获取定标曲线方程：利用已知浓度值的试剂定标品，通过对报告灰度值与浓度值进行回归分析，获得定标曲线方程；
12、步骤十，计算浓度值：根据步骤八的报告灰度值，使用步骤九的定标曲线方程，计算出对应的浓度值。
13、优选的，步骤二中，包括样品预处理、试剂添加、混匀、反应、洗涤和分离。
14、优选的，步骤五中，红光滤波片、红外滤波片及报告值滤波片配有切换装置，用于将任一滤波片调整至至光学轴线上。
15、优选的，步骤六具体为：
16、s6.1，灰度化处理：
17、通过平均算法将红光照片与红外光照片的rgb值转换灰度值，
18、
19、其中，表示当前坐标点的灰度值，、、分别为红色分量、绿色分量、蓝色分量的值；
20、s6.2，高斯滤波处理：
21、用一个3x3模板扫描图像中的每一个像素，用模板确定的领域内像素的加权平均灰度值去替代模板中心像素点的值，高斯滤波的3x3的匹配模板如下，
22、
23、其中，表示当前像素；
24、离散化窗口滑窗卷积实现高斯滤波，卷积中每个像素点的值由其本身和领域内的其他像素经过加权平均后得到，上述匹配模板为二维数组所存放的系数，对于大小为的窗口模板，各个元素的计算公式为，
25、
26、其中，表示当前窗口模板中第行、第列像素点的元素值，表示窗口模板的取值，表示标准差；
27、s6.3，伽马变换图像校正：
28、对原图像上每一个像素值做乘积运算，
29、
30、其中，为常数系数，为图像的像素值，取值范围0~255，为伽马变换因子，值以1为分界，值越小，对图像低灰度部分的扩展作用就越强，值越大，对图像高灰度部分的扩展作用就越强的图像增强效果明显；
31、s6.4，jpeg压缩。
32、优选的，步骤九中，采用logistic回归模型拟合定标曲线方程，
33、
34、其中，表示因变量即浓度值，表示自变量即报告灰度值，表示曲线的下限或起始值，表示曲线的上限或饱和值，表示曲线的斜率参数，表示曲线的平移参数。
35、优选的，步骤九中，同一个张照片被激发出来的荧光值与靶值的偏差超过10%时，根据校准的数据及偏差自动将超过10%的荧光值进行区域划分，得到新的定标曲线方程，后续测量使用对应的定标曲线方程方程。
36、本专利技术具有如下有益效果：
37、1.自动化：利用自动化设备进行样本处理和分析，减少了人工操作的误差，提高了检测的准确性和可重复性；
38、2.灵敏度高：通过将待测样本与试剂中的磁珠抗体相互作用，并通过sape放大荧光信号，可以提高检测的灵敏度，使得低浓度目标物也能够被准确检测到；
39、3.多项目、多参数分析：能够同时检测多个项目，通过灰度图像的分析和计算，最多可进行50种微球的正常分类，可以确定微球的种类分布图，并计算出每个项目微球的报告灰度值；
40、4.高效：分为红光光源和绿光光源，红光光源进行分类，绿光光源进行报告值的采集，一分钟内对2000个混合微球进行分类，并精确采集每种微球的报告值；
41、5.定量测量：通过使用定标曲线方程，根据报告灰度值计算出对应的浓度值，实现了目标物浓度的定量测量；
42、6.自动校正：根据校准的数据及偏差自动将超过10%的荧光值进行区域划分，得到不同的方程，保证测量的精确性；
43、7.高通量：该方法能够同时处理多个样本，提高了检测效率，通过批量处理样本，可以大大缩短检测时间，仪器具有100个样本孔位，可在1.5个小时之内全部出结果。
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2.根据权利要求1所述的全自动液态悬浮芯片检测方法，其特征在于，
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【技术特征摘要】
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2.根据权利要求1所述的全自动液态悬浮芯片检测方法，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的全自动液态悬浮芯片检测方法，其特征在于，
4....
【专利技术属性】
技术研发人员：夏智敏，
申请(专利权)人：南京艾拓生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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