一种抗炎重组蛋白基水凝胶的制备方法及其产品和应用技术

技术编号:42199446 阅读:25 留言:0更新日期:2024-07-30 18:46
本发明专利技术提供一种抗炎重组蛋白基水凝胶的制备方法及其产品和应用,通过质粒构建、原核表达及纯化获得CsgA‑GHK重组蛋白单体;然后将CsgA重组蛋白在洗脱缓冲液中在室温的条件下,自组装形成以β‑折叠结构为元件的纳米纤维,这些蛋白质纤维的物理缠结实现凝胶化;该抗炎重组蛋白基水凝胶的构建骨架为具有遗传可编程性和自组装成纳米纤维的能力的CsgA蛋白,将铜结合肽GHK(glyyl‑l‑histidyl‑l‑lysine)与CsgA融合,具有抗炎抗氧化、组织保护和再生能力;相比于基于CsgA的活菌水凝胶更安全、应用更广泛,利用大肠杆菌原核表达系统获取原料,相比于活性多肽的合成水凝胶成本更低。CsgA重组蛋白自组装水凝胶系统可以解决其免疫原性和内在细胞毒性问题,在组织修复方面具有很大的应用潜力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及了水凝胶材料领域,具体涉及了一种抗炎重组蛋白基水凝胶的制备方法及其产品和应用


技术介绍

1、随着生物材料在医学领域应用的不断进展,许多研究揭示了生物材料在脊髓损伤修复中的潜力。水凝胶作为一种三维水性基质,可以模拟细胞外基质(extracellularmatrix,ecm)的复杂结构,并作为桥梁促进神经再生,在脊髓损伤修复中具有良好的应用前景。

2、水凝胶包括天然材料水凝胶和人工合成材料水凝胶。天然材料水凝胶包括脱细胞组织和细胞外基质衍生的大分子,如胶原、壳聚糖和透明质酸等制备的水凝胶,具有良好的生物相容性。人工合成材料水凝胶,如甲基丙烯酸酯、聚乙二醇(peg)等制备的水凝胶,通常存在生物相容性及降解性差、副产物具有细胞毒性等问题。但是,多数天然材料由于以“自上而下”、“物求其用”的获取方式及应用思路,存在批次差异、免疫原性的风险,并且功能设计存在局限性。因此,以“自下而上”、“需求引导生物合成”的方式制备序列可设计、功能可调控的编程生物基材料具有广阔前景。其中以氨基酸生物基材料为主。多肽自组装水凝胶因其合成简单、序列具有一定可设本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种抗炎重组蛋白基水凝胶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的抗炎重组蛋白基水凝胶的制备方法,其特征在于,所述步骤1中,CsgA-GHK重组蛋白核酸序列的设计过程包括以下步骤:获取大肠杆菌菌毛蛋白CsgA的CDS序列,通过柔性连接子将抗炎活性肽GHK、6*His与CsgA的C端融合,之后将融合片段插入原核表达载体的HindIII和Xho I之间。

3.根据权利要求2所述的抗炎重组蛋白基水凝胶的制备方法,其特征在于,所述步骤1中,使用ExTaq酶对目的片段进行PCR扩增,经过琼脂糖凝胶电泳回收,得到目的片段。

4.根据权利要...

【技术特征摘要】

1.一种抗炎重组蛋白基水凝胶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的抗炎重组蛋白基水凝胶的制备方法,其特征在于,所述步骤1中,csga-ghk重组蛋白核酸序列的设计过程包括以下步骤:获取大肠杆菌菌毛蛋白csga的cds序列,通过柔性连接子将抗炎活性肽ghk、6*his与csga的c端融合,之后将融合片段插入原核表达载体的hindiii和xho i之间。

3.根据权利要求2所述的抗炎重组蛋白基水凝胶的制备方法,其特征在于,所述步骤1中,使用extaq酶对目的片段进行pcr扩增,经过琼脂糖凝胶电泳回收,得到目的片段。

4.根据权利要求3所述的抗炎重组蛋白基水凝胶的制备方法,其特征在于,所述步骤1中,利用hindiii和xho i限制性内切酶对原核表达载体及目的片段进行双酶切,使用t4连接酶对载体与片段进行连接,将扩增后的目标基因序列插入原核体系表达质粒载体。

5.根据权利要求4所述的抗炎重组蛋白基水凝胶的制备方法,其特征在于,所述步骤2中,将所述步骤1得到原核感受态...

【专利技术属性】
技术研发人员:郑立飞魏昳
申请(专利权)人:国科温州研究院温州生物材料与工程研究所
类型:发明
国别省市:

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1