一种双酶催化生产2-酮基-D-葡萄糖酸的方法技术

本申请涉及微生物发酵生产的技术领域，更具体地说，它涉及一种双酶催化生产2‑酮基‑D‑葡萄糖酸的方法。一种双酶催化生产2‑酮基‑D‑葡萄糖酸的方法，其步骤为：以玉米淀粉水解糖为底物，向玉米淀粉水解糖中添加葡萄糖脱氢酶处理液及葡萄糖酸脱氢酶处理液，反应24‑48h，得到2‑酮基‑D‑葡萄糖酸。本申请的双酶催化生产2‑酮基‑D‑葡萄糖酸的方法具有原料利用率高，生产强度高的优点。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及微生物发酵生产的，更具体地说，它涉及一种双酶催化生产2-酮基-d-葡萄糖酸的方法。

技术介绍

1、酮基-d-葡萄糖酸，又被称为2-酮-d-葡萄糖酸，是一种葡萄糖酸的衍生物，其在食品、医药、毛纺、电镀、饲料加工、工业水处理及石油化工领域均有广泛应用，同时，还可以直接作为食品添加剂使用。另外，2-酮基-d-葡萄糖酸还可以通过进一步的化学反应生成其他具有高附加值的化合物，如2-丁二醇、丁二酸等，因此，酮基-d-葡萄糖酸的生产和应用对于促进经济发展和改善人民生活具有重要意义。

2、国内外普遍采用生物发酵和化学合成相结合的工艺制备2-酮基-d-葡萄糖酸，其主要过程是将淀粉用酶水解生成葡萄糖，然后用细菌以葡萄糖为底物发酵生产2-酮基-d-葡萄糖，然后再进行化学合成得到2-酮基-d-葡萄糖酸。

3、在工业化生产中，通常采用葡萄糖和玉米浆分别作为2-酮基-d-葡萄糖酸发酵的碳源和氮源，但是上述工艺生产存在着高浓度发酵周期长、菌种不耐高渗透压等缺点，而且，发酵原料对发酵转化率、发酵产量、产物质量及生产成本均具有显著影响，发酵液成分复杂、杂质本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种双酶催化生产2-酮基-D-葡萄糖酸的方法，其特征在于，其步骤为：以玉米淀粉水解糖为底物，向玉米淀粉水解糖中添加葡萄糖脱氢酶处理液及葡萄糖酸脱氢酶处理液，反应24-48h，得到2-酮基-D-葡萄糖酸。

2.根据权利要求1所述的双酶催化生产2-酮基-D-葡萄糖酸的方法，其特征在于，所述葡萄糖脱氢酶处理液/葡萄糖酸脱氢酶处理液的制备方法为：取沙雷氏菌接种至LB液体培养基中，置于25-40℃、150-200rpm的条件下培养至菌液OD值为0.6-0.8，加入诱导剂IPTG至其终浓度为0.4-0.6mM，置于15-20℃、100-120rpm诱导表达16h，将培养液于4℃条件下...

【技术特征摘要】

1.一种双酶催化生产2-酮基-d-葡萄糖酸的方法，其特征在于，其步骤为：以玉米淀粉水解糖为底物，向玉米淀粉水解糖中添加葡萄糖脱氢酶处理液及葡萄糖酸脱氢酶处理液，反应24-48h，得到2-酮基-d-葡萄糖酸。

2.根据权利要求1所述的双酶催化生产2-酮基-d-葡萄糖酸的方法，其特征在于，所述葡萄糖脱氢酶处理液/葡萄糖酸脱氢酶处理液的制备方法为：取沙雷氏菌接种至lb液体培养基中，置于25-40℃、150-200rpm的条件下培养至菌液od值为0.6-0.8，加入诱导剂iptg至其终浓度为0.4-0.6mm，置于15-20℃、100-120rpm诱导表达16h，将培养液于4℃条件下7000-10000rpm离心5-10min收集菌体，然后将菌体重悬于缓冲液中，经破碎纯化后，加入同浓度的葡萄糖脱氢酶/葡萄糖酸脱氢酶，得到葡萄糖脱氢酶处理液/葡萄糖酸脱氢酶处理液。

3.根据权利要求2所述的双酶催化生产2-酮基-d-葡萄糖酸的方法，其特征在于：所述葡萄糖脱氢酶处理液及葡萄糖酸脱氢酶处理液为依次加入，具体为，先加入葡萄糖脱氢酶处理液，反应12-24h，再加入葡萄糖酸脱氢酶处理液，继续反应12-24h。

4.根据权利要求3所述的双酶催化生产2-酮基-d-葡萄糖酸的方法，其特征在于：所述葡萄糖酸脱氢酶处理液与所述葡萄糖脱氢酶处理液的摩尔浓度比为1：（90-110）。

5.根据权利要求4所述的双酶催化生产2-酮基-d-葡萄糖酸的方法，其特征在于：所述葡萄糖脱氢酶处理液与所述玉米淀粉水解糖的摩尔浓度比为1：（900-1100）。

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【专利技术属性】
技术研发人员：卢正东，雷华，史建勋，王维，邹荣华，黄佳佳，
申请(专利权)人：广济药业济宁有限公司，
类型：发明
国别省市：