一种合成2’-FL的大肠杆菌及合成2’-FL的方法技术

本发明专利技术公开了一种合成2’‑FL的大肠杆菌及合成2’‑FL的方法，涉及微生物基因工程技术领域。本发明专利技术通过在大肠杆菌中上调2'‑FL从头合成途径上基因manB,ManC,gmd，wcaG，lacY，futC的表达水平，并沉默表达大肠杆菌内源的底物GDP‑L‑岩藻糖合成相关基因、乳糖代谢相关基因以及中间产物GDP‑L‑岩藻糖分解代谢相关基因，同时引入NADPH代谢相关基因，通过精准调控微生物合成代谢中内关键酶的辅因子从而提升GDP‑L‑岩藻糖的产量，进而显著提升2’‑岩藻糖基乳糖的产量达到3.9g/L，具备良好的工业应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物基因工程，具体而言，涉及一种合成2’-fl的大肠杆菌及合成2’-fl的方法。

技术介绍

1、母乳寡糖(human milk oligosaccharides，hmos)是人乳中一类非单一结构、非消化性碳水化合物的总称，对婴幼儿的健康及生长发育具有重要作用，已被用作婴儿配方食品的功能性成分。2’-岩藻糖基乳糖(2’fucosyllactose，2’-fl)是母乳寡糖中含量最多的一种，约占总母乳寡糖的1/3，是目前最具有潜力的一种母乳寡糖。2’-岩藻糖基乳糖具有调节肠道菌群、抵抗病原菌的黏附、免疫调节及促进神经系统发育和修复等多种功能，已被多个国家或地区批准作为婴儿配方奶粉的添加剂，具有较大的应用价值和市场需求。2’-fl可通过α1,2岩藻糖基转移酶，以gdp l岩藻糖(gdp l fucose，gdp l fuc)和乳糖为底物合成。

2、此外，提高辅因子atp和gtp的再生能力也是提高2′fl产量的有效策略。近年来，多种ntp再生系统被设计、构建，并用于调控微生物合成代谢中内关键酶的辅因子，如gdp/gtp、adp/atp等的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种合成2’-岩藻糖基乳糖的大肠杆菌，其特征在于，所述大肠杆菌沉默表达大肠杆菌内源的底物GDP-L-岩藻糖合成相关基因、乳糖代谢相关基因以及中间产物GDP-L-岩藻糖分解代谢相关基因；

2.根据权利要求1所述的合成2’-岩藻糖基乳糖的大肠杆菌，其特征在于，所述底物GDP-L-岩藻糖合成相关基因还包括：氨酸脱氢酶基因gdhA和6-磷酸葡萄糖异构酶基因pgi。

3.根据权利要求2所述的合成2’-岩藻糖基乳糖的大肠杆菌，其特征在于，在宿主细胞大肠杆菌中敲除lacZ，并在lacZ位点处整合lacY；敲除wcaJ，并在wcaJ位点整合futC基因；敲除nudK，并在nu...

【技术特征摘要】

1.一种合成2’-岩藻糖基乳糖的大肠杆菌，其特征在于，所述大肠杆菌沉默表达大肠杆菌内源的底物gdp-l-岩藻糖合成相关基因、乳糖代谢相关基因以及中间产物gdp-l-岩藻糖分解代谢相关基因；

2.根据权利要求1所述的合成2’-岩藻糖基乳糖的大肠杆菌，其特征在于，所述底物gdp-l-岩藻糖合成相关基因还包括：氨酸脱氢酶基因gdha和6-磷酸葡萄糖异构酶基因pgi。

3.根据权利要求2所述的合成2’-岩藻糖基乳糖的大肠杆菌，其特征在于，在宿主细胞大肠杆菌中敲除lacz，并在lacz位点处整合lacy；敲除wcaj，并在wcaj位点整合futc基因；敲除nudk，并在nudk位点处整合nadk；敲除nudd，并在nudd位点处整合icd；敲除gdha，并在gdha位点处整合maeb；敲除pgi，并在pgi位点处整合stha；敲除lon，并在lon位点处整合zwf；敲除poxb，并在poxb位点处整合gnd。

4.根据权利要求2所述的合成2’-岩藻糖基乳糖的大肠杆菌，其特征在于，所述异柠檬酸nad+脱氢酶基因icd的核苷酸序列如seq id no.6所示，所述苹果酸酶基因maeb的核苷酸序列如seq id no.7所示，所述可溶性吡啶核苷酸转移酶编码基因stha的核苷酸序列如seqid no.8所示；

5.根据权利要求1所述的合成2’-岩藻糖基乳糖的大肠杆菌，其特征在于，所述2’-岩藻糖基乳糖合成酶编码基因futc的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述磷酸甘露糖变位酶基因manb的核苷酸序列如seq id no.2所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱永亮，
申请(专利权)人：苏州普瑞森生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：