一种一步法发酵生产2-KGA的外源表达系统及构建方法和应用技术方案

本发明专利技术公开了一种一步法发酵生产2‑KGA的外源表达系统及构建方法和应用，属于维生素C生产技术领域。本发明专利技术创造性地将酮古龙酸杆菌中的SSDH、GSDH基因在氧化葡萄糖酸杆菌中进行异源表达，使氧化葡萄糖酸杆菌具备SSDH、GSDH的功能，实现了由氧化葡萄糖酸杆菌一步发酵生产2‑KGA，可以实现直接由D‑山梨醇得到2‑KGA，从而大幅降低菌株培养、转化、发酵的工作量，大幅缩短由D‑山梨醇得到2‑KGA的周期，降低维生素C生产过程的工作量，缩短生产周期，进而大幅降低生产成本；外源表达系统构建方法简单易操作，可以用于维生素C的大规模生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及维生素c生产，尤其是涉及一种一步法发酵生产2-kga的外源表达系统及构建方法和应用。

技术介绍

1、维生素c(vitamin c)又称为l-抗坏血酸(l-ascorbic acid)，广泛分布在植物组织中，新鲜水果及蔬菜中含量尤多，是生物体中具有多效功能的必需化合物，在保护生物体必需的生物分子(蛋白质、脂质、碳水化合物、dna和rna等)免受自由基(如羟基自由基、超氧化物、单线态氧和过氧化氢)损害方面发挥着重要作用，广泛应用于食品、饮料、制药、化妆品和饲料等领域。

2、维生素c的工业化生产，从其历史发展进程看可以分为浓缩提取、化学合成和生物发酵三个阶段。浓缩提取生产方法发生于19世纪二三十年代，人们对于维生素c的结构、性质不了解的时期，此方法生产成本高，产量极其有限，远远不能满足人们的需求。

3、化学合成阶段以“莱氏法”为代表：以d-葡萄糖为原料，在镍的催化作用下，高温高压加氢还原成d-山梨醇，然后利用一步发酵氧化成l-山梨糖，然后在丙酮和硫酸的作用下，经酮化生成双丙酮-l-山梨糖，再用苯或甲苯提取、水法除去单酮山梨糖本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种一步法发酵生产2-KGA的外源表达系统，其特征在于：所述外源表达系统为将重组表达质粒转入氧化葡萄糖酸杆菌构成；重组表达质粒包括GSDH和SSDH片段，GSDH的序列如SEQ ID NO.1所示，SSDH的序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的一种一步法发酵生产2-KGA的外源表达系统，其特征在于：氧化葡萄糖酸杆菌保藏于中国微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCC1.110。

3.根据权利要求1所述的一种一步法发酵生产2-KGA的外源表达系统，其特征在于：所述重组表达质粒以pBla质粒为基本骨架，经添加酶切位点、抗性基因、SSDH和GS...

【技术特征摘要】

1.一种一步法发酵生产2-kga的外源表达系统，其特征在于：所述外源表达系统为将重组表达质粒转入氧化葡萄糖酸杆菌构成；重组表达质粒包括gsdh和ssdh片段，gsdh的序列如seq id no.1所示，ssdh的序列如seq id no.2所示。

2.根据权利要求1所述的一种一步法发酵生产2-kga的外源表达系统，其特征在于：氧化葡萄糖酸杆菌保藏于中国微生物菌种保藏中心，保藏编号为cgmcc1.110。

3.根据权利要求1所述的一种一步法发酵生产2-kga的外源表达系统，其特征在于：所述重组表达质粒以pbla质粒为基本骨架，经添加酶切位点、抗性基因、ssdh和gsdh片段构成。

4.一种如权利要求1或2所述的重组表达质粒。

5.包含权利要求4所述重组表达质粒的工程菌。

6.一种如权利要求1-3任一项所述的一步法发酵生产2-kga的外源表达系统、权利要求4所述的重组...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟成，崔吉晓，冯帅，杨静，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：