【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于病毒检测领域，具体公开了一种同时检测腺病毒和巨细胞病毒的taqman双重荧光pcr方法，并公开了同时检测巨细胞病毒和腺病毒的引物及探针组合，以及试剂盒。
技术介绍
1、巨细胞病毒(cytomegalovirus，cmv)是一种疱疹病毒组dna病毒。亦称细胞包涵体病毒，由于感染的细胞肿大，并具有巨大的核内包涵体。巨细胞病毒分布广泛，其他动物皆可遭受感染，引起以生殖泌尿系统，中枢神经系统和肝脏疾患为主的各系统感染，从轻微无症状感染直到严重缺陷或死亡。
2、腺病毒(adenovirus,adv)是一种无包膜的线性双链dna病毒，具有广泛的细胞和组织感染能力。感染过程剧烈，adv可通过呼吸道、接触传播、粪-口途径传播，患者因感染部位不同，而可能出现呼吸道感染，消化道感染等。
3、两种病毒引起的临床症状及病理变化极为相似，现有分别检测两种病毒的qpcr方法，但是依然存在着通量低、成本较高、时间更长等技术壁垒。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术公开了一种同时检测腺病毒和巨细胞病毒的taqman双重荧光pcr方法，并公开了同时检测巨细胞病毒和腺病毒的引物及探针组合，以及试剂盒。
2、本专利技术的技术方案如下：
3、一种用于同时检测巨细胞病毒和腺病毒的引物及探针组合，所述引物及探针组合包括：
4、用于检测巨细胞病毒的引物对，该引物对包括：
5、上游引物cmv f，其序列为seq id no.1＝ca
6、下游引物cmv r，其序列为seq id no.2＝tcgcgtatcgcttgtacctc；
7、用于检测巨细胞病毒的探针，该探针为c m v pr o b e探针，其序列为：seq idno.3＝atcccgggcctgagcatctcag+cy5荧光标记；
8、用于检测腺病毒的引物对，该引物对包括：
9、上游引物adv f，其序列为seq id no.4＝caccgagacgtacttcagcc；
10、下游引物adv r，其序列为seq id no.5＝gatgaaccgcagcgtcaaac；
11、用于检测腺病毒的探针，该探针为a d v pr o b e探针，其序列为：seq id no.6＝tttagaaaccccacggtggcgc+fam荧光标记。
12、进一步的，本专利技术公开了一种用于同时检测巨细胞病毒和腺病毒的检测试剂盒，包括上述的引物及探针组合。
13、进一步的，本专利技术公开了一种同时检测腺病毒和巨细胞病毒的taqman双重荧光pcr方法，所述方法不用于疾病的诊断和治疗目的，使用上述的引物及探针组合。
14、进一步的，上述一种同时检测腺病毒和巨细胞病毒的taqman双重荧光pcr方法，包括以下步骤：
15、1)特异性引物探针设计
16、2)反应条件、反应体系优化
17、3)样本核酸提取
18、4)上机运行
19、5)结果分析。
20、进一步的，上述一种同时检测腺病毒和巨细胞病毒的taqman双重荧光pcr方法，所述反应体系如下：
21、 组分 每次反应的体积 <![cdata[taqman<sup>tm</sup>预混液]]> 10ul adv/cmv f 0.4ul adv/cmv r o.4ul adv/cmv p 0.2ul <![cdata[ddh<sub>2</sub>o]]> 补充至20ul 反应总体积 20ul
22、进一步的，上述一种同时检测腺病毒和巨细胞病毒的taqman双重荧光pcr方法，所述反应条件如下：
23、a.95℃5min,1循环；
24、b.95℃10s,60℃30s 40循环，收集荧光。
25、进一步的，本专利技术公开了上述引物及探针组合在制备同时检测巨细胞病毒和腺病毒的检测试剂盒中的应用。
26、进一步的，本专利技术公开了上述方法在制备同时检测巨细胞病毒和腺病毒的检测试剂盒中的应用。
27、相比现有技术，本专利技术具有如下有益效果：
28、公开了一种同时检测腺病毒和巨细胞病毒的taqman双重荧光pcr方法，并公开了同时检测巨细胞病毒和腺病毒的引物及探针组合，以及试剂盒，所述引物及探针组合包括：用于检测巨细胞病毒的引物对，该引物对包括：上游引物cmv f，和下游引物cmv r，用于检测巨细胞病毒的探针，该探针为c m v pr o b e探针，用于检测腺病毒的引物对，该引物对包括：上游引物adv f，其下游引物adv r，用于检测腺病毒的探针，该探针为a d v pr o be探针，本方法通过设计特异性引物探针、优化反应体系及条件等实验项，最终得以建立，所述的试剂盒在疾病的快速诊断中，节约了一定经济成本和人力时间成本，提高了诊断效率，为临床应用中提供了参考依据。
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1.一种用于同时检测巨细胞病毒和腺病毒的引物及探针组合，其特征在于，所述引物及探针组合包括：
2.一种用于同时检测巨细胞病毒和腺病毒的检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的引物及探针组合。
3.一种同时检测腺病毒和巨细胞病毒的TaqMan双重荧光PCR方法，其特征在于，所述方法不用于疾病的诊断和治疗目的，使用如权利要求1所述的引物及探针组合。
4.根据权利要求2所述的同时检测腺病毒和巨细胞病毒的TaqMan双重荧光PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述反应体系如下：
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述反应条件如下：
7.如权利要求1所述的引物及探针组合在制备同时检测巨细胞病毒和腺病毒的检测试剂盒中的应用。
8.如权利要求3-6任一项所述的方法在制备同时检测巨细胞病毒和腺病毒的检测试剂盒中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种用于同时检测巨细胞病毒和腺病毒的引物及探针组合，其特征在于，所述引物及探针组合包括：
2.一种用于同时检测巨细胞病毒和腺病毒的检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的引物及探针组合。
3.一种同时检测腺病毒和巨细胞病毒的taqman双重荧光pcr方法，其特征在于，所述方法不用于疾病的诊断和治疗目的，使用如权利要求1所述的引物及探针组合。
4.根据权利要求2所述的同时检测腺病毒...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙吉，翟晓晨，邹灵龙，
申请(专利权)人：苏州康维讯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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