一种基于醛基巯基反应的蛋白偶联方法技术

本发明专利技术专利属于生物化学尤其蛋白化学偶联技术领域，对当前蛋白化学偶联方法具有扩充意义。主要涉及一种基于醛基与巯基间反应特性的一种蛋白偶联方法，其过程包括：1）对选定糖蛋白或糖链分子采用高碘酸盐法进行氧化处理，使其醛基化；2）对选定蛋白采用双功能试剂或通过还原法引入巯基；3）将醛基化物与巯基化物建立碱性条件的反应体系；4）室温环境下反应10‑24小时。基于本方法的反应产物为α‑羟基硫醚形式，较之醛基与氨基反应聚合效率有显著提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物化学，涉及一种基于醛基巯基反应的蛋白偶联方法。

技术介绍

1、蛋白偶联是指为了某种特殊的研究或检测目的而将两个相同或不同的蛋白分子通过共价键联系在一起的技术或过程，例如在分子检测领域常常将辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶及β-半乳糖苷酶等与抗体偶联。

2、蛋白偶联通常基于蛋白分子中具有反应性的化学基团，例如氨基、巯基、羧基以及糖链中羟基等。氨基（-nh2，伯胺形式）是最为常用的基团，在蛋白分子中相对含量高，能够与活化羧基（如：琥珀酰亚胺酯、磺基琥珀酰亚胺酯）、醛基、异硫氰酸酯等反应，反应通常需在碱性环境。蛋白分子中半胱氨酸残基中含巯基，但通常以二硫键形式存在，经还原处理可生成巯基。巯基能够与马来酰亚胺、吡啶二硫化物及卤代乙酰反应。蛋白分子的天冬氨酸、谷氨酸残基中含羧基，能够与碳二亚胺发生反应。在糖蛋白的糖链上的邻二醇（相邻羟基）经氧化可形成醛基，可与氨基发生schiff反应。

3、蛋白偶联方法通常有高碘酸盐法、双马来酰亚胺法、巯基-马来酰亚胺法。其中高碘酸盐法利用高碘酸盐溶于水产生的hio4氧化蛋白糖链中的邻二醇，使碳键本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于醛基巯基反应的蛋白偶联方法，其特征在于：利用醛基与巯基之间的反应特性将第一蛋白分子与糖链分子偶联，或者是将第一蛋白分子与糖蛋白偶联，具体包含以下关键步骤;

2.根据权利要求1所述的基于醛基巯基反应的蛋白偶联方法，其特征在于：所述高碘酸盐为高碘酸钠或高碘酸钾中至少一种。

3.根据权利要求2所述的基于醛基巯基反应的蛋白偶联方法，其特征在于：所述糖链为葡聚糖10，所述糖蛋白为牛血清白蛋白。

4.根据权利要求3所述的基于醛基巯基反应的蛋白偶联方法，其特征在于：所述双功能试剂为N-琥珀酰亚胺基 S-乙酰硫代乙酸酯或3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥...

【技术特征摘要】

1.一种基于醛基巯基反应的蛋白偶联方法，其特征在于：利用醛基与巯基之间的反应特性将第一蛋白分子与糖链分子偶联，或者是将第一蛋白分子与糖蛋白偶联，具体包含以下关键步骤;

2.根据权利要求1所述的基于醛基巯基反应的蛋白偶联方法，其特征在于：所述高碘酸盐为高碘酸钠或高碘酸钾中至少一种。

3.根据权利要求2所述的基于醛基巯基反应的蛋白偶联方法，其特征在于：所述糖链为葡聚糖10，所述糖蛋白为牛血清白蛋白。

4.根据权利要求3所述的基于醛基巯基反应的蛋白偶联方法，其特征在于：所述双功能试剂为n-琥珀酰亚胺基 s-乙酰硫代乙酸酯或3-(2-吡啶二巯基)丙酸n-羟基琥珀酰亚胺酯中的至少一种。

5.根据权利要求4所述的基于醛基巯基反应的蛋白偶联方法，其特征在于：所述第一蛋白分子为辣根过氧化物酶或牛血清白蛋白。

6.根据权利要求5所述的基于醛基巯基反应的蛋白偶联方法，其特征在于：所述步骤s1中采用高碘酸钠对葡聚糖10分子进行氧化，所述高碘酸钠由醋酸钠缓冲液配得。

【专利技术属性】
技术研发人员：梁旺，顾文然，程娟，尹智孚，
申请(专利权)人：中汉生物医学技术研究昆山有限公司，
类型：发明
国别省市：