一种鸡小肠类器官的培养基及培养方法技术

本发明专利技术公开了一种鸡小肠类器官的培养基及培养方法，涉及类器官培养技术领域，该培养基主要包括：L‑WNR条件培养基、基础培养基、Wnt通路激活剂R‑Spondin‑1、BMP受体抑制剂Noggin、ROCK抑制剂Y‑27632、p38MAPK抑制剂SB 202190、TGF‑β受体I型(TGF‑βRI)激酶抑制剂LY2157299、Laduviglusib(具有口服活性的GSK‑3α/β抑制剂和Wnt/β‑catenin信号通路激活剂)和Notch信号激活剂Jagged‑1，以及其他特异性添加因子，该方法采用多种抗生素对小肠组织进行清洗，使用EDTA进行消化和涡旋振荡仪来分离小肠中的绒毛和隐窝，获得大量干净且密度高的肠隐窝细胞，大大提高了鸡小肠类器官样本的培养成功率，并减少污染。结合类器官的传代、冻存技术可以在有限时间内获得充足的类器官开展科学研究。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及类器官培养，特别涉及一种鸡小肠类器官的培养基及培养方法。

技术介绍

1、肠道上皮细胞是机体接触各种食物、营养物质、药物、代谢物、细菌、病毒和寄生虫的主要部位，因此肠道内稳态对维持动物健康至关重要。但肠道的体外研究一直存在困难。目前尚缺乏理想的肠上皮体外研究模型。

2、覆盖在消化道粘膜的单层极化上皮细胞对动物的消化、营养吸收和肠道屏障功能扮演着重要作用。系连续体外模型的缺乏，使得动物肠道上皮功能的研究受到了极大阻碍。传统的2d细胞系或原代细胞不能概括动物体内肠上皮的生理特征，它们只包含单一的细胞类型，缺乏天然上皮细胞的复杂性和生理特性，并且经常积累突变。新鲜分离的原代细胞和肠道组织被认为能更准确地模拟体内生理，但它们不能长期培养，这限制了它们在发育、生理和再生研究中的应用。因此，迫切需要开发更适合的体外培养模型。而体外构建的肠道类器官提供了一个与体内生理相关性较高的细胞模型，这些类器官可以在几天内快速生成，最终分化为包含多种肠细胞的成熟类器官，重现了天然上皮的原始拓卜结构和功能。重要的是，由于来源于单一动物的肠道类器官可以在几乎无限本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种鸡小肠类器官的培养基及培养方法，包括分子培养基由L-WNR条件培养基和基础培养基组成，其特征在于：所述L-WNR条件培养基在分子培养基中的体积百分比浓度为50％，其余为基础培养基(含10％胎牛血清和1％青霉素/链霉素双抗)；

2.根据权利要求1所述的一种鸡小肠类器官的培养基及培养方法，其特征在于：所述50％L-WRN条件培养基、50％基础培养基、1×B-27(50X，7504-044，Gibco)、1×N2-添加剂(Gibco，17502048，100×)()、10mM HEPES(H1095，Solarbio)、10mM的烟酰胺(nicotinamide)、1mM ...

【技术特征摘要】

1.一种鸡小肠类器官的培养基及培养方法，包括分子培养基由l-wnr条件培养基和基础培养基组成，其特征在于：所述l-wnr条件培养基在分子培养基中的体积百分比浓度为50％，其余为基础培养基(含10％胎牛血清和1％青霉素/链霉素双抗)；

2.根据权利要求1所述的一种鸡小肠类器官的培养基及培养方法，其特征在于：所述50％l-wrn条件培养基、50％基础培养基、1×b-27(50x，7504-044，gibco)、1×n2-添加剂(gibco，17502048，100×)()、10mm hepes(h1095，solarbio)、10mm的烟酰胺(nicotinamide)、1mm l-glutamine(l-谷氨酰胺，g8230，solarbio)、1％penicillin/streptomycin(100×，merck)、50ng/ml human egf(peprotech)、100ng/ml human noggin(peprotech)、500ng/ml human r-spondin-1(peprotech)、0.5μmgalunisertib(ly2157299，hy-13226，mce)、10μm sb 202190(hy-10295，mce)、3μm chir990...

【专利技术属性】
技术研发人员：菅复春，李静，李森阳，菅忆晨，张素梅，张龙现，孟庆大，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：