一种用于HPV相关肿瘤的早筛和监测试剂盒制造技术

本申请涉及DNA检测技术领域，具体涉及一种用于HPV相关肿瘤的早筛和监测试剂盒、方法及应用。本申请基于多重ddPCR利用混合探针可一次性检测血浆中游离的四种HPV亚型，与常规检测技术相比，该试剂盒操作简单安全，无创，成本低，而且周期短；同时试剂盒检测灵敏度更高且特异性强，最低检测限仅为250copies/ml。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及dna检测，具体涉及一种用于检测血浆中游离hpv，进而实现hpv相关肿瘤的早筛和预后监测试剂盒、方法及其应用。

技术介绍

1、人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,hpv)是一种小分子的环状双链dna病毒。该病毒具有组织特异性，与宫颈、头颈部等肿瘤密切相关。我国hpv检测的型别范围：hpv16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68共13种基因型列为高危型。它们具有非常高的致癌风险，尤其是hpv 16、18。

2、现有hpv的检测有多种方法，包括hpv e6/e7 mrna检测、hpv dna检测、免疫组化p16检测等。hpv e6/e7 mrna原位杂交技术是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。在光镜或电镜下观察e6/e7 mrna并定位。hpv rna原位杂交能够反映hpv的转录活性水平，这是其他检测方法不具备的，因此，逐渐成为是确定hpv状态的最有效方法之一。hpv dna检测一般通过pcr或原位杂交检测。该本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种可用于cfDNA中HPV高灵敏度检测和分型的ddPCR引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针在单管体系内同时针对四种HPV亚型；

2.根据权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，所述引物具体是通过如下方法设计筛选：

3.根据权利要求1-2任一所述的引物探针组合物，其特征在于，所述引物的序列具体如SEQ ID NO.1-10所示，或与SEQ ID NO.1-10至少90％以上同源性；所述探针的序列具体如SEQ ID NO.11-15所示，或与SEQ ID NO.11-15至少90％以上同源性。

4.根据权利要求1-3任一所述的引物探针组合物...

【技术特征摘要】

1.一种可用于cfdna中hpv高灵敏度检测和分型的ddpcr引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针在单管体系内同时针对四种hpv亚型；

2.根据权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，所述引物具体是通过如下方法设计筛选：

3.根据权利要求1-2任一所述的引物探针组合物，其特征在于，所述引物的序列具体如seq id no.1-10所示，或与seq id no.1-10至少90％以上同源性；所述探针的序列具体如seq id no.11-15所示，或与seq id no.11-15至少90％以上同源性。

4.根据权利要求1-3任一所述的引物探针组合物，其特征在于，所述探针的5’端均标记有荧光报告基团，3’端均标记有淬灭基团；

5.根据权利要求1-4任一所述的引物探针组合物，其特征在于，所述hpv16、hpv18、hpv52、hpv56和内参基因的引物浓度比为等比例；探针浓度比为1-2:4-6:0.5-1:1-2:0.5-1。

6.根据权利要求1-5任一所述的引物探针...

【专利技术属性】
技术研发人员：王喆，张传豪，王若雨，赵耿昊，朱艳梅，吴华健，
申请(专利权)人：大连大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：