一种快速鉴定蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的新型SNP分子靶标及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种快速鉴定蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的新型SNP分子靶标及其应用。本发明专利技术收集蜡样芽孢杆菌族群菌株基因组，对已有菌株分类信息进行真实性确证分析，对蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌标准菌株的全基因组序列根据CRISPR/Cas12a识别需求进行切片，通过比对筛选出在非编码区高度保守且存在SNP差异的可区分靶标序列NC‑2和ANN，并利用本组实验菌株进行验证和筛选区分蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的新型分子靶标。包括NC‑2和ANN的引物设计，引物对的筛选，分别以蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌为模板进行PCR‑CRISPR/Cas12a实验，实现对蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的准确鉴别。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物检测领域，具体涉及一种快速鉴定蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的新型snp分子靶标及其应用。

技术介绍

1、蜡样芽孢杆菌(bacillus cereus)和苏云金芽孢杆菌(bacillus thuringiensis)同属蜡样芽孢杆菌类群。其中，蜡样芽孢杆菌是常见的食源性条件致病菌，可产生腹泻毒素(肠毒素)和呕吐毒素。苏云金芽孢杆菌是一类昆虫致病菌。其在形成芽孢的同时会形成一个或多个伴胞晶体，其主要成分是杀虫晶体蛋白，因此被广泛地用作生物杀虫剂。蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌生理生化特征高度相似，可用于辨别的唯一区别是伴胞晶体的产生能力。此外，二者具有高度的遗传相似性，16s rrna序列具有99％-100％相似性，dddh(digital dna-dnahybridization)值大于物种划分阈值70％，ani值大于物种划分阈值95％，都高于种群鉴定的标准值，极难区分。目前尚无一种在全球范围内广泛认可的、能够有效区分蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的快速检测鉴定方法，鉴定时可能造成误判，给食品安全和产业带来极大的安全隐患。因此，亟需建立一种对本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.非疾病的诊断和治疗目的的鉴定蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的分子靶标NC-2和ANN，其特征在于，所述NC-2的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述ANN的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.一种非疾病的诊断和治疗目的的鉴定蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的引物组，其特征在于，序列如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示，或如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示。

3.一种非疾病的诊断和治疗目的的快速鉴定蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：提取待测样品的基因组DNA，以基因组DNA为模板，以权利要...

【技术特征摘要】

1.非疾病的诊断和治疗目的的鉴定蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的分子靶标nc-2和ann，其特征在于，所述nc-2的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述ann的核苷酸序列如seq id no.2所示。

2.一种非疾病的诊断和治疗目的的鉴定蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的引物组，其特征在于，序列如seq id no.5和seq id no.6所示，或如seq id no.7和seq id no.8所示。

3.一种非疾病的诊断和治疗目的的快速鉴定蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：提取待测样品的基因组dna，以基因组dna为模板，以权利要求2所述的引物组作为pcr扩增引物，用pcr-crispr/cas12a荧光法识别包含分子靶标的扩增子的snp差异，若扩增子中存在与crrna完全互补的序列则激活反式切割活性，切割报告探针产生荧光信号，对蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌进行有效区分。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的pcr-crispr/cas12a荧光法，其pcr反应体系包括：taq dna polymerase、待测样品dna、引物对、灭菌双蒸水；

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的pcr反应体系为2×taqdnapolymerase10μl，待测样品dna 50ng，10μm上、上下游引物各1μl，灭菌双蒸水...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁郁，谢纪航，赵一冰，王涓，吴清平，尚玉婷，汪智，王峥峥，余树波，王彦涛，薛亮，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：